[发明专利]基于柱的完全可扩展的rAAV制造工艺在审
| 申请号： | 201780022146.8 | 申请日： | 2017-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN109152821A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 曲光;吴永勋;陆林;约翰·弗雷泽·莱特 | 申请（专利权）人： | 星火治疗有限公司 |
| 主分类号： | A61K38/46 | 分类号： | A61K38/46;C12N15/86 |
| 代理公司： | 上海胜康律师事务所 31263 | 代理人： | 樊英如;张静 |
| 地址： | 美国宾夕*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 根据本发明，其中提供了纯化重组腺相关(rAAV)载体颗粒的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 载体颗粒 制造工艺 可扩展 | ||
【主权项】：
1.一种纯化重组腺相关(rAAV)载体颗粒的方法，所述方法包括以下步骤：(a)收获含有rAAV载体颗粒的细胞和细胞培养上清液以产生收获物；(b)任选地浓缩步骤(a)中产生的所述收获物以产生浓缩的收获物；(c)裂解步骤(a)中产生的所述收获物或步骤(b)中产生的所述浓缩的收获物以产生裂解物；(d)处理步骤(c)中产生的所述裂解物以减少所述裂解物中的污染核酸，从而产生核酸减少的裂解物；(e)过滤步骤(d)中产生的所述核酸减少的裂解物以产生澄清的裂解物，并任选地稀释所述澄清的裂解物以产生稀释的澄清的裂解物；(f)将步骤(e)中产生的所述澄清的裂解物或稀释的澄清的裂解物进行阴离子交换柱色谱法，以产生包含rAAV载体颗粒的柱洗脱液，并任选浓缩所述柱洗脱液以产生浓缩的柱洗脱液；(g)对步骤(f)中产生的所述柱洗脱液或所述浓缩的柱洗脱液进行尺寸排阻柱色谱法，以产生包含rAAV载体颗粒的第二柱洗脱液，从而将rAAV载体颗粒与蛋白质杂质分离，并任选地稀释所述第二柱洗脱液，以产生稀释的第二柱洗脱液；(h)将步骤(g)中产生的所述第二柱洗脱液或所述稀释的第二柱洗脱液进行阳离子交换柱色谱法，以产生包含rAAV载体颗粒的第三柱洗脱液，从而将rAAV载体颗粒与蛋白质或其它生产杂质分离，并任选地浓缩所述第三柱洗脱液以产生浓缩的第三柱洗脱液；以及(i)过滤步骤(h)中产生的所述第三柱洗脱液或所述浓缩的第三柱洗脱液，从而产生纯化的rAAV载体颗粒。
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