[发明专利]利用自动化遗传操作和菌株纯化步骤建立真菌生产菌株的方法在审
| 申请号： | 201780085062.9 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN110268063A | 公开（公告）日： | 2019-09-20 |
| 发明（设计）人： | K·S·布鲁诺;P·韦斯特福尔;E·谢夫奇克;K·罗特席尔德-曼奇内里 | 申请（专利权）人： | 齐默尔根公司 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/09;C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京律盟知识产权代理有限责任公司 11287 | 代理人： | 李春秀 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | 本公开提供了一种利用自动化来转化、筛选和选择丝状真菌细胞的高通量HTP微生物基因组工程化改造方法和系统。所述方法和系统利用HTP选择和反选择来纯化同核转化丝状真菌细胞。此外，本公开提供了一种生产和长期储存源自丝状真菌细胞的原生质体的方法。 | ||
| 搜索关键词： | 丝状真菌细胞 自动化 微生物基因组 长期储存 菌株纯化 生产菌株 系统利用 遗传操作 原生质体 高通量 工程化 真菌 转化 筛选 改造 生产 | ||
【主权项】：
1.一种生产丝状真菌菌株的方法，所述方法包括：a.)提供多个原生质体，其中所述原生质体由丝状真菌细胞培养物制备；b.)用第一构建体和第二构建体转化所述多个原生质体，其中所述第一构建体包括第一多核苷酸，所述第一多核苷酸在两侧由与所述原生质体的基因组中的第一基因座同源的核苷酸侧接，并且所述第二构建体包括第二多核苷酸，所述第二多核苷酸在两侧由与所述原生质体的基因组中的第二基因座同源的核苷酸侧接，其中转化引起所述第一构建体通过同源重组整合到所述第一基因座中并且所述第二构建体通过同源重组整合到所述第二基因座中，其中至少所述第二基因座是所述原生质体基因组中的第一可选择标记基因，并且其中所述第一多核苷酸包括突变和/或遗传控制元件；c.)通过进行选择和反选择来纯化同核转化体；和d.)在有利于所述丝状真菌细胞的再生的培养基中使所述经过纯化的转化体生长。
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