[发明专利]副溶血性弧菌指纹图谱库的制备方法

摘要

本发明公开了一种副溶血性弧菌指纹图谱库的制备方法，包括：设计保守序列对应的特异性引物；对基因组DNA进行多重扩增；对多重PCR产物进行纯化；纯化产物通过质谱仪检测，得到不同副溶血性弧菌的特征核酸指纹图谱；将步骤得到的不同分离株的核酸指纹特征图谱，通过计算机软件进行汇总和整理，得到副溶血性弧菌的标准核酸指纹特征图谱。基于该方法，建立常见副溶血性弧菌的核酸指纹图谱数据库，可对环境卫生、食品安全检测、公共场所安全、进出口检验检疫等领域的副溶血性弧菌分型进行鉴定，以维护公共卫生安全。

主权项

1.一种用作质谱鉴定副溶血性弧菌分型的多重PCR产物的副溶血性弧菌指纹图谱库的制备方法，包括如下步骤：(1)合成副溶血性弧菌DNA片段保守序列的质粒，并设计其对应的特异性引物；其中，保守序列分别选自副溶血性弧菌DNA的tlh片段(SEQ ID NO.7)、tdh片段(SEQ IDNO.8)、trh片段(SEQ ID NO.9)，所述片段的特异性引物序列分别选自：SEQ ID NO.1和SEQID NO.2，SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6；(2)用步骤(1)中的引物组合对基因组DNA进行多重扩增；(3)对PCR产物进行检测，检查PCR扩增质量；(4)使用DNA吸附柱对多重PCR产物进行纯化；(5)纯化产物与基质形成结晶混合物，点样于芯片上；(6)通过MALDI TOF质谱仪检测，得到不同副溶血性弧菌的特征核酸指纹图谱；(7)将步骤(6)得到的不同分离株的核酸指纹特征图谱，通过计算机软件进行汇总和整理，得到副溶血性弧菌的标准核酸指纹特征图谱。