[发明专利]一种鹰嘴豆豆瓣多肽的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种鹰嘴豆豆瓣多肽的制备方法及其应用，该方法中采用鹰嘴豆豆瓣油脂成分充分脱脂，磷酸缓冲溶液提取，中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶或木瓜蛋白酶四种酶水解，利用超滤膜技术制备分子量为6‑10kDa，3.5‑6kDa，1‑3.5kDa的多肽，再利用喷雾干燥或冷冻干燥精制而成。该多肽粉被验证其抗细菌和真菌活性，具有广泛的抗微生物活性，同时具有增强体液免疫及全身免疫的功能，富含人体易消化和吸收的纯天然植物来源多肽和蛋白质。该蛋白质的特点是既保留了鹰嘴豆原有的生物活性的同时还实现变废为宝和资源充分利用的目的；该蛋白质作为天然抗菌剂、食品添剂或药物，可用于食品和医药行业。

主权项

一种鹰嘴豆豆瓣多肽的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：a、将鹰嘴豆发芽脱皮后的干燥的豆瓣粉碎，过80目筛，按w/v豆粉:石油醚=1:5加入石油醚，在室温下振荡4h进行脱脂，反复提取3‑4次至无色为止，鹰嘴豆豆瓣粉自然沉降与石油醚分离后，倾倒出上层石油醚进行回收，合并沉淀物，自然干燥，得到脱脂的鹰嘴豆豆瓣粉，置于温度‑20℃冰箱保存备用；b、将步骤a中脱脂后的100g鹰嘴豆豆瓣粉中加350ml pH为7.4，0.1M的磷酸缓冲液，料液比为1:3.5，温度为4℃，提取48h；c、将步骤b中的提取液经过滤、10000r/min，温度4℃，离心10min，温度4℃，透析48h，压力9.8Pa，温度‑80℃，冻干24h，得到10.27g粗提蛋白粉，蛋白提取率为10.27%；d、将步骤c中的粗提蛋白粉电泳，测抗菌活性，测蛋白含量19.14%；e、将步骤d中的粗提蛋白粉通过中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶或木瓜蛋白酶水解，得到的鹰嘴豆豆瓣总多肽，再经超滤，分离，酶解，冷冻干燥得到多肽粉；f、将步骤e中的酶解物离心，取上清液经10kDa再生纤维滤膜截流分离，压力0.10MPa，温度25℃，流速35m/s，保留浓缩液，再将滤出液分别经6kDa，3.5kDa再生纤维滤膜截流分离，依次制备分子量为6‑10kDa，3.5‑6kDa，1‑3.5kDa的多肽，然后取各部分多肽溶液进行真空干燥，利用液质联LC/MS仪器检测不同分子量多肽。