[发明专利]一种细胞接种及挑选细胞单克隆的方法、应用

摘要

本发明属于细胞克隆技术领域，具体涉及一种细胞接种及挑选细胞单克隆的方法、应用。细胞接种时在超净工作台中水平静置20‑30min，然后直接水平移入二氧化碳培养箱培养，这样可以达到细胞种板均匀，成功率可接近100％；在挑选细胞单克隆时，不适用玻璃克隆环，而是使牛津杯环状的底部沾满一层封闭液，将牛津杯放在选定的克隆之上，不会导致漏液的发生。

主权项

1.一种细胞接种及挑选细胞单克隆的方法，其特征在于，包括细胞接种和挑选细胞单克隆，其中细胞接种包括以下步骤：步骤(1)，选取对数生长期的细胞，消化细胞，计数并稀释，得到细胞悬液；步骤(2)，在孔板中均加入培养基，晃动孔板至培养基浸润整个孔底，然后移除培养基，水平放置孔板；步骤(3)，混匀步骤(1)中的细胞悬液，在步骤(2)孔板的孔内加入细胞悬液，静置20‑30min；步骤(4)，孔板经步骤(3)的静置后保持水平状态并移入二氧化碳培养箱培养，培养后细胞即能够均匀分布于孔板内；步骤(5)，将步骤(4)中孔板孔内的细胞进行细胞转染，培养，直到有细胞单克隆的出现，用于挑选细胞单克隆；所述挑选细胞单克隆包括以下步骤：步骤A，选择步骤(5)中符合要求的细胞单克隆，进行标记；步骤B，移除步骤(5)中培养板内的培养液，用PBS缓冲液冲洗培养板，并移除悬浮起来的细胞；步骤C，将牛津杯底部粘附上封闭液；然后将牛津杯放在选定的细胞单克隆之上，垂直放下，圈住细胞单克隆；步骤D，加0.25g/100ml胰酶到牛津杯里；室温下孵育1‑5min；加培养基至到牛津杯中使细胞悬浮，然后将悬浮的细胞转移，完成细胞单克隆的挑选。