[发明专利]检测人血液ZnT8A的量子点荧光层析免疫分析试剂

摘要

本发明公开了检测人血液ZnT8A的量子点荧光层析免疫分析试剂，该试剂包括底板，在底板的上面设置有样品垫，量子点标记物结合垫，层析反应膜和吸水垫，其中量子点标记物结合垫上吸附有量子点标记的鼠抗人IgG抗体，层析反应膜上有两条分别固定着ZnT8蛋白的检测线和葡萄球菌蛋白A的质控线，将待测人全血或血浆样本滴加至样品垫上后，经过3‑4分钟的层析反应，用荧光免疫分析仪检测检测线和质控线的荧光强度，即可通过内置软件计算出该样品中的锌转运蛋白8自身抗体含量。具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性强等优点。

主权项

1.一种检测人血液ZnT8A的量子点荧光层析免疫分析试剂，包括底板(1)，在底板的上面设置有样品垫(2)，量子点标记物结合垫(3)，层析反应膜(4)和吸水垫(5)，其特征是：所述样品垫用下述方法制成：用0.01M，pH＝7.2的Tris‑HCl作溶剂，将抗红细胞抗体配成0.1‑0.2mg/ml溶液，用喷膜仪按20‑50ul/cm2的量将红细胞抗体溶液喷至聚酯纤维膜上，晾干备用；所述量子点标记物结合垫用下述方法制成：1)取50ul、5‑20mg/mL的量子点加入100ul 20mM pH＝7.2的PBS，再加入10‑20μL 25％的戊二醛，混匀，室温搅拌活化3‑6小时；2)将步骤1)获得的液体用10‑50mM pH＝7.2的PBS透析20‑24小时，换液2‑3次；3)将鼠抗人IgG抗体用20mM pH＝7.2的PBS配成3‑5mg/mL，取20μL加入步骤2)获得的液体中混匀，2‑8℃搅拌反应8‑12小时，20000RPM离心1‑1.5小时，弃去上清液，向沉淀中加入500μL 20mM pH＝7.2的PBS，使沉淀悬浮起来，20000RPM离心1‑1.5小时，弃去上清液；4)向步骤3)得到的沉淀中加入100‑200μL封闭溶液使沉淀悬浮混匀，超声分散30‑60秒，4℃避光保存；封闭液的配制为20mM PBS，pH＝7.2，BSA10g/L；5)按体积比为1：4的比例，将步骤4)获得的液体与标记物稀释液，混匀，用喷膜仪按10‑20ul/cm2的量喷至聚酯纤维膜上，晾干备用；所述层析反应膜用下述方法制成：1)将ZnT8蛋白用0.01M，pH＝7.3的Tris‑HCl稀释至浓度为0.4‑0.8mg/ml为A溶液；2)将ProteinA用0.01M，pH＝7.3的Tris‑HCl稀释至浓度为1.5‑3.0mg/ml为B溶液；3)用划膜仪在硝酸纤维素膜上用A溶液划出检测线(6)，用B溶液划出质控线(7)。