[发明专利]大菱鲆生精上皮不同发育时期生殖细胞及体细胞的标记方法及应用有效
| 申请号： | 201810075341.3 | 申请日： | 2018-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN108330195B | 公开（公告）日： | 2021-06-25 |
| 发明（设计）人： | 柳意樊;刘清华;李军;徐世宏;王彦丰 | 申请（专利权）人： | 浙江海洋大学;中国科学院海洋研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6841 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 316000 浙江省舟*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了大菱鲆生精上皮不同发育时期生殖细胞及体细胞的标记方法及应用，从大菱鲆精巢cDNA中扩增Amh/Sox9/Gsdf片段，经克隆并择优后提取质粒，以限制性内切酶线性化质粒，回收质粒后制备探针，将样品处理后进行固定、脱水、包埋，切片后进行荧光原位杂交，最后进行细胞核染色，封片后观察拍照。有益效果为：本发明方法巧妙地将大菱鲆几个关键发育时期的精细胞及Sertoli细胞区分开，标记方法简单易行，精确度较高；大菱鲆生精上皮不同发育时期生殖细胞及体细胞的标记方法可以应用于其他海洋生物的生精上皮细胞区分及标记，为今后鱼类的精子发生及生精上皮内环境研究提供有效方法和科学依据。 | ||
| 搜索关键词： | 大菱鲆 上皮 不同 发育 时期 生殖细胞 体细胞 标记 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.大菱鲆生精上皮不同发育时期生殖细胞及体细胞的标记方法，包括：探针的制备、切片的制备、荧光原位杂交，其特征在于：所述切片的制备步骤为：杂交前实验所用器皿，离心管，试剂均采用0.1%DEPC处理，并高压消毒；用多聚甲醛溶液固定样品过夜，使用梯度甲醇脱水，之后以石蜡包埋，将包埋好的性腺样品进行组织切片，切片厚度为4‑5µm，切片用DEPC处理水展好，烘干过夜后冷藏。
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