[发明专利]利用筑波链霉菌提高他克莫司发酵产量的方法

摘要

本发明涉及利用筑波链霉菌提高他克莫司发酵产量的方法。本发明通过基因工程手段，首次向筑波链霉菌(Streptomyces tsukubaensis NRRL 18488)基因组中插入正调控基因tsuZ及其靶基因tsuS2，来增加基因工程菌中正调控基因tsuZ及其靶基因tsuS2表达量，以达到提升基因工程菌发酵产FK506能力之目的。通过上述策略构建出的基因工程菌发酵FK506产量为324mg/L，较出发菌株‑S.tsukubaensis NRRL18488产量提高了36％。因此，本发明对于提升菌株发酵FK506产量具有很大的应用潜力。同时，也为利用基因工程手段改造菌株发酵高产FK506提供新的方法。

主权项

1.一种利用筑波链霉菌提高他克莫司发酵产量的方法；具体步骤如下：1)根据tsuZ和tsuS2已知序列设计PCR引物，以S.tsukubaensis NRRL18488基因组DNA为模板，扩增正调控因子tsuZ基因以及其靶基因tsuS2；2)将正调控基因tsuZ与靶基因tsuS2通过融合PCR串联成一个大片段，将所得大片段整合到表达载体pIB139中，得到重组表达载体pOtsuZS2；3)将2)中构建好的重组表达载体pOtsuZS2，利用接合转移方法整合到S.tsukubaensis NRRL18488基因组上，构建成基因工程菌；4)培养3)中所构建的基因工程菌株，发酵生产FK506。