[发明专利]Cebpa基因缺失斑马鱼突变体的制备及其应用在审
| 申请号： | 201810087330.7 | 申请日： | 2018-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN108103108A | 公开（公告）日： | 2018-06-01 |
| 发明（设计）人： | 袁浩;周隽;朱军 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属瑞金医院 |
| 主分类号： | C12N15/89 | 分类号： | C12N15/89;C12N15/90;A01K67/027;A61K49/00 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 曹莉 |
| 地址： | 200025 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种Cebpa基因缺失斑马鱼突变体的制备及其应用；设计针对斑马鱼cebpa基因的TALEN序列；构建其左右臂质粒，并体外转录出相应的mRNA；将TALEN左右臂mRNA混合并显微注射到斑马鱼受精卵中；注射后的胚胎养至F0成鱼与野生型成鱼交配，将携带有cebpa基因突变的胚胎养至F1成鱼；含有cebpa基因突变的F1成鱼再与野生型成鱼交配，产生的胚胎养至F2成鱼，通过剪鱼尾鳍抽提基因组DNA的方法鉴定，确定所述突变体。本发明通过TALEN基因编辑技术，能够快速高效的建立cebpa基因缺失斑马鱼品系，利用该模型能够开展针对治疗白血病，肝脏发育不良以及粒细胞缺失等疾病的药物筛选工作。 | ||
| 搜索关键词： | 成鱼 基因缺失 斑马鱼 突变体 胚胎 基因突变 野生型 左右臂 交配 制备 斑马鱼受精卵 斑马鱼品系 转录 基因组DNA 发育不良 方法鉴定 显微注射 药物筛选 粒细胞 鱼尾鳍 基因 并体 抽提 构建 质粒 白血病 肝脏 应用 注射 携带 疾病 治疗 | ||
【主权项】：
1.一种Cebpa基因缺失斑马鱼突变体的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、设计针对斑马鱼cebpa基因的TALEN序列；S2、构建TALEN的左、右臂质粒，并分别体外转录出TALEN左、右臂mRNA；S3、将TALEN左、右臂mRNA混合并显微注射到斑马鱼受精卵中；S4、将注射后的胚胎养至F0成鱼，并与野生型成鱼交配，对产生的胚胎进行限制性内切酶方法以及DNA测序方法鉴定，将携带有cebpa基因突变的胚胎养至F1成鱼；S5、对F1成鱼进行剪鱼尾鳍抽提基因组DNA方法鉴定是否存在cebpa基因突变，并通过DNA测序方法确定其cebpa基因突变类型，将含有cebpa基因突变的F1成鱼再次与野生型成鱼交配，产生的胚胎养至F2成鱼；S6、对F2成鱼通过剪鱼尾鳍抽提基因组DNA的方法鉴定，确定突变鱼系，该突变鱼系即所述Cebpa基因缺失斑马鱼突变体。
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