[发明专利]一种鱼源半乳糖凝集素CaGal重组蛋白的制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201810089975.4 | 申请日： | 2018-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN108409850A | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 孔祥会;王莉;张杰;赵贤亮;裴超 | 申请（专利权）人： | 河南师范大学 |
| 主分类号： | C07K14/46 | 分类号： | C07K14/46;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/17;A61P37/04;A61P31/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 新乡市平原智汇知识产权代理事务所(普通合伙) 41139 | 代理人： | 路宽 |
| 地址： | 453007 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种鱼源半乳糖凝集素CaGal重组蛋白的制备方法及其应用，属于水产动物分子生物学领域。本发明的技术方案要点为：以淇河鲫cDNA为模板，采用F/R为引物进行PCR扩增，PCR产物CaGal与载体pET‑32a连接，构建pET‑32a‑CaGal重组表达载体；转化至大肠杆菌BL21(DE3)获得大肠杆菌表达菌株pET‑32a‑CaGal‑BL21，即可表达半乳糖凝集素CaGal重组蛋白，经分离和纯化获得鱼源半乳糖凝集素CaGal重组蛋白。本发明制备的CaGal重组蛋白可保持其天然生物学活性，能够有效抑制嗜水气单胞菌等病原菌，抑菌效果明显，并且制备方法简单，可作为一种新型的鱼类免疫添加剂或抗菌药物。 | ||
| 搜索关键词： | 重组蛋白 半乳糖 凝集素 制备 病原菌 大肠杆菌表达菌株 分子生物学领域 技术方案要点 嗜水气单胞菌 重组表达载体 大肠杆菌 分离和纯化 生物学活性 抗菌药物 水产动物 有效抑制 鱼类免疫 构建 抑菌 引物 添加剂 应用 转化 | ||
【主权项】：
1.一种鱼源半乳糖凝集素CaGal重组蛋白的制备方法，其特征在于：以淇河鲫肝脏cDNA为模板，采用F/R为引物进行PCR扩增，其中正向引物F：CGGGGTACCATGGCTTTTTATCAGCAACAGCCGT，划线部分为Kpn I酶切位点，反向引物R：CCCAAGCTTTTAAGCCTGCACAAAAGTCAGCTGC，划线部分为Hind III酶切位点，PCR产物CaGal与载体pET‑32a连接构建pET‑32a‑CaGal重组表达载体；将pET‑32a‑CaGal重组表达载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)获得大肠杆菌表达菌株pET‑32a‑CaGal‑BL21，即可表达半乳糖凝集素CaGal重组蛋白，经分离和纯化获得鱼源半乳糖凝集素CaGal重组蛋白，该鱼源半乳糖凝集素CaGal重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
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