[发明专利]单亚基RNA聚合酶、其纯化方法及在RNA合成中的应用

摘要

本发明公开单亚基RNA聚合酶、其纯化方法及在RNA合成中的应用。所述的单亚基RNA聚合酶，为来自φKMV类噬菌体的单亚基RNA聚合酶；或来自与所述φKMV类噬菌体的单亚基RNA聚合酶的蛋白质序列同源性高于25%并含有如序列表SEQ ID NO.1所示的特征氨基酸序列，且总氨基酸序列数目在800~830之间的其他噬菌体单亚基RNA聚合酶。经研究发现本发明提供的RNA聚合酶与现有的RNA工具酶亲缘关系较远，其转录效率较高。在与现有T7 RNA聚合酶和Syn5 RNA聚合酶相比较时，针对后二者在合成富含稳定高级结构RNA时产物复杂的问题，本发明单亚基RNA聚合酶显示出转录产物均一的显著优点。

主权项

1.单亚基RNA聚合酶，其特征在于，来自φKMV类噬菌体的单亚基RNA聚合酶；或来自与所述φKMV类噬菌体的单亚基RNA聚合酶的蛋白质序列同源性高于25%并含有如序列表SEQID NO. 1所示的特征氨基酸序列，且总氨基酸序列数目在800~830之间的其他噬菌体的单亚基RNA聚合酶；其中，序列表SEQ ID NO. 1中每个Xaa独立代表任意氨基酸；所述单亚基RNA聚合酶的蛋白质氨基端均含有组氨酸标签，所述组氨酸的编码碱基序列如序列表SEQ ID NO. 2所示；或者，所述单亚基RNA聚合酶的蛋白质氨基端均含有FLAG标签、HA标签、SBP标签、Avi标签、Nus标签、V5标签中的一种；所述标签与单亚基RNA聚合酶之间由0~10个氨基酸组成保持柔性的肽段连接。