[发明专利]一种快速筛选合成米格列醇关键中间体突变菌株的方法及菌株

摘要

本发明提供了一种快速定量检测米格列醇关键中间体突变菌株的方法及菌株，所述方法将野生氧化葡糖杆菌经诱变处理后的诱变菌株进行发酵培养，取发酵培养后的诱变菌株湿菌体细胞加入底物反应液中，在15℃转化反应完全后，将反应液离心，测上清中6NSL含量，根据6NSL含量的高低来筛选获得合成米格列醇关键中间体的高活力突变菌株。本发明所提供的检测方法具有简便、快捷、特异性高，重复性好等特点，该方法能够进一步应用于高活力氧化葡糖杆菌的筛选，有效加快育种进程，筛选获得的突变菌株转化合成米格列醇中间体6NSL催化能力显著提升，适用于米格列醇的工业化大规模生产。

主权项

1.一种快速筛选合成米格列醇关键中间体突变菌株的方法，其特征在于所述方法为：将野生氧化葡糖杆菌经诱变处理后的诱变菌株进行发酵培养，取发酵培养后的诱变菌株湿菌体细胞加入底物反应液中，在15℃转化反应完全后，将反应液离心，取上清加入DNPH显色溶液，37℃保温15min后加入NaOH水溶液终止反应并测定445nm处吸收峰值，根据6NSL标准曲线，获得上清中6NSL含量，根据6NSL含量筛选获得合成米格列醇关键中间体的高活力突变菌株；所述底物反应液终浓度组成为：N‑羟乙基葡萄糖胺60g/L、七水硫酸镁5g/L，pH 5.0，溶剂为去离子水；所述DNPH显色溶液是将DNPH用HCl水溶液溶解后加去离子水配制而成；所述6NSL标准曲线是将6NSL用去离子水配制成不同浓度梯度，与上清相同条件下测定445nm处吸收峰值，以不同梯度浓度为横坐标，以吸收峰值为纵坐标制备而成。