[发明专利]一种分离提纯蛋清溶菌酶的方法

摘要

本发明公开了一种用阳离子交换法结合超滤技术分离提纯蛋清溶菌酶的方法，其包括如下步骤：(1)蛋清预处理：蛋清搅拌后过筛网过滤；(2)树脂预处理；(3)吸附：调节蛋清滤液pH值后加入预处理后的树脂，搅拌后静置吸附；(3)洗脱：用NaCl溶液搅拌洗脱，滤出洗脱液，重复洗脱并合并洗脱液；(4)超滤：将洗脱液用超滤离心管超滤除蛋白、脱盐，得到超滤液；(5)干燥：将超滤液干燥后，即得到所述溶菌酶。所得溶菌酶经过SDS‑PAGE电泳测得纯度高达96％，比活力大于20000U/mg。本发明工艺简单，成本较低，制备获得的溶菌酶纯度高、活性高。

主权项

一种分离提纯蛋清溶菌酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)蛋清预处理：将蛋清搅拌均匀后，过80～120目滤网得蛋清滤液；(2)树脂预处理：取树脂用蒸馏水洗涤至无明显杂质并滤干，先用盐酸溶液浸泡后，再用蒸馏水冲洗得树脂A；树脂A在氢氧化钠溶液浸泡后，用蒸馏水冲洗得树脂B；其中，树脂选自724大孔弱酸性阳离子交换树脂、732型阳离子交换树脂、D152大孔弱酸性阳离子交换树脂中的一种；(3)吸附：往蛋清滤液中加入步骤(2)所得树脂B，搅拌混匀后静置吸附，弃去上清液，用蒸馏水洗涤，得树脂L；(4)洗脱：向步骤(3)所得树脂L中加入NaCl溶液，搅拌洗脱，滤出洗脱液，重复洗脱合并所得洗脱液，保留滤出洗脱液后的树脂；(5)超滤：将步骤(4)所得洗脱液先置于截留量为50KD的超滤离心管中，离心并取下层液；后将下层液置于截留量为3KD的超滤离心管中，离心并取上层截留液，即得到所述溶菌酶。