[发明专利]一种检测环境中甲状腺激素干扰物诱导活性的方法

摘要

本发明公开了一种检测环境中甲状腺激素干扰物诱导活性的方法，采用大鼠垂体瘤GH3细胞作为检测手段，半贴壁培养至指数生长期，加入环境样品的有机溶剂提取液，继续培养后，加入MTT溶液，通过酶标仪490nm波长检测光密度值，以3,3',5‑三碘‑L‑甲腺原氨酸(下简称T3)为标准化合物，绘制T3对GH3细胞的生长诱导的剂量‑效应关系标准曲线，进而评价样品中甲状腺激素干扰物的毒性效应。本方法快速简便、成本低廉、省时省力，能够到样品中甲状腺激素干扰物的毒性当量值，可以作为环境样品和可疑甲状腺激素干扰物的快速筛查手段。

主权项

1.一种检测环境中甲状腺激素干扰物诱导活性的方法，其特征在于包括以下步骤：S1、接种：取96孔板，选择生长良好的大鼠垂体瘤GH3细胞制备5×104个/mL的细胞悬液，按照200μL/孔接种，于含5％CO2的培养箱中37℃条件下培养2‑3d；S2、上样：待细胞贴壁后，取步骤S1得到的96孔板，弃去上清液；取离心管，每个离心管中加入990μL无酚红F12培养基，再加入10μL溶于DMSO的待测样品；另外取离心管，添加10μL DMSO作为对照，按每孔200μL添加于96孔板中，在CO2培养箱中暴露96h；S3、反应：反应结束前4h取出步骤S2得到的96孔板，弃去上清液，每孔加入MTT溶液50μL，置于CO2培养箱中继续孵育4h，待反应产物formazan结晶形成后，小心吸取上清液，加入150μL DMSO终止反应，室温下于96孔板摇床震荡充分溶解还原产物；S4、样品检测：用酶标仪检测步骤S3待测样品反应液的光密度值；S5、标准曲线制作：以时间为横坐标，酶标仪检测经过步骤S3反应后不同浓度的T3的反应液的光密度值为纵坐标，绘制剂量－效应标准曲线，将样品的光密度值与标准曲线对比得到样品的T3毒性当量。