[发明专利]一种犬细小病毒单克隆抗体IgG2b-Fab片段的制备方法在审
| 申请号： | 201810126622.7 | 申请日： | 2018-02-08 |
| 公开（公告）号： | CN108085358A | 公开（公告）日： | 2018-05-29 |
| 发明（设计）人： | 陈振师;吴鹏飞;杨彦超;安鹏丽;赵颖 | 申请（专利权）人： | 保定冀中药业有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/08 | 分类号： | C12P21/08;C12P21/06;C07K1/22 |
| 代理公司： | 北京德崇智捷知识产权代理有限公司 11467 | 代理人： | 贾凯 |
| 地址： | 071000*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种犬细小病毒单克隆抗体IgG2b‑Fab片段的制备方法，包括以下步骤：1、采用木瓜蛋白酶酶解单克隆抗体IgG2b后，透析、离心，得上清液；2、分别将琼脂糖‑Protein G和琼脂糖‑Protein L装入层析柱，用结合Buffer进行平衡；3、将上清液泵入琼脂糖‑Protein G层析柱中，收集流出液；用洗杂Buffer清洗，再用洗脱Buffer洗脱，收集洗脱液A，即Fc片段；4、将流出液泵入琼脂糖‑Protein L层析柱中，用洗杂Buffer清洗，再用洗脱Buffer洗脱，收集洗脱液B，即IgG2b‑Fab片段。本发明操作简单易控，重复性强、获得的Fab片段纯度高。 | ||
| 搜索关键词： | 琼脂糖 洗脱 单克隆抗体 细小病毒 层析柱 流出液 上清液 洗脱液 泵入 洗杂 种犬 制备 清洗 木瓜蛋白酶酶解 装入层 透析 平衡 | ||
【主权项】：
1.一种犬细小病毒单克隆抗体IgG2b-Fab片段的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、采用木瓜蛋白酶酶解犬细小病毒单克隆抗体IgG2b后，装入截留分子量小于10KD的透析袋中，于结合Buffer中进行透析，然后将酶解液于4℃12000rpm离心20min，弃沉淀，得上清液；所述酶解用酶解体系为：10mg/mL犬细小病毒单克隆抗体IgG2b，0.5mg/ml木瓜蛋白酶，10mmol/L-半胱氨酸，2mmol/L EDTA，去离子水定容，pH7.6；酶解时间4h；步骤二：将琼脂糖-Protein G和琼脂糖-Protein L分别装入层析柱中，分别用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡，得琼脂糖-Protein G层析柱和琼脂糖-Protein L层析柱，备用；步骤三、将步骤一所得的上清液泵入琼脂糖-Protein G层析柱中，收集流出液；然后用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，再用5-10倍柱体积的洗脱Buffer洗脱Fc片段，收集洗脱液A，即Fc片段；步骤四、将步骤三收集的流出液泵入琼脂糖-Protein L层析柱中，然后10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗，再用5-10倍柱体积的洗脱Buffer洗脱Fab片段，收集洗脱液B，即IgG2b-Fab片段。
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