[发明专利]一种结合光子晶体的分支滚环扩增检测miRNA的方法

摘要

本发明公开了一种结合光子晶体的分支滚环扩增检测miRNA的方法。该方法由四个部分组成：a.制备点状光子晶体；b.5’端磷酸化的锁式探针的两末端与靶标miRNA互补配对后利用T4RNA ligase 2连接成环；c.以成环的锁式探针作为模板，靶标miRNA作为引物，在phi29DNA聚合酶的作用下发生线性滚环扩增，通过加入二级引物，使线性滚环扩增沿着支链方向扩增，达到信号进一步放大；d.往滚环扩增产物中加入SYBR GREENⅠ染料后加到点状光子晶体上进行检测。本发明通过利用光子晶体效应对发光的调控，增强荧光强度，从而增强检测的灵敏度，降低检测下限，在最优实验条件下，该方法的线性范围为0.1aM‑1pM，miRNA的检测限低至1aM。本发明无需对循环miRNA进行分离提取，可直接用于实际样本中循环miRNA的检测。

主权项

1.一种结合光子晶体的分支滚环扩增检测miRNA的方法，其特征在于，由以下四个部分组成：一、向载玻片上涂覆PDMS层，烘干后向PDMS层上滴加微球水分散液，加热，通过溶液挥发过程中的表面张力将微球有序的组装到PDMS基底上，形成点状光子晶体；所述微球为修饰有羧基的二氧化硅、聚甲基丙烯酸甲酯或聚苯乙烯微球；二、5’端磷酸化的锁式探针的两末端与靶标miRNA互补配对后利用T4 RNA ligase 2连接酶连接成环；三、分支滚环扩增：以成环后的锁式探针作为模板、靶标miRNA作为引物，在Phi29 DNA聚合酶的作用下发生线性滚环扩增，通过引入二级引物，与线性滚环扩增产物互补配对，沿着支链方向扩增，达到信号扩增的目的；四、向滚环扩增产物中加入SYBR GREENⅠ染料，孵育后将其滴加到光子晶体上进行检测。