[发明专利]去细胞甲床的制备方法以及组织工程化甲床的构建方法

摘要

本发明涉及一种去细胞甲床的制备以及基于该去细胞甲床的组织工程化甲床的构建方法，其中采用脱细胞技术来制备去细胞甲床，该去细胞甲床无细胞及核酸成分，细胞外基质的结构及活性成分保存良好，生物相容性极佳；再基于该去细胞甲床来体外接种人源性的甲床干细胞，构建组织工程化甲床；构建的组织工程化甲床具备与正常甲床一致的组织结构和组成成分，并且接种的甲床干细胞具有特定的分化潜能，该组织工程化甲床具有一定程度的生长指甲的能力，可实现甲床缺损的修复，具有极佳的应用前景。

主权项

1.一种去细胞甲床的制备方法，其特征在于，该制备方法至少包括以下依次进行的步骤：步骤1)，取甲床组织：在无菌条件下获取患者的甲床组织，且保留甲床根部；步骤2)，通过震荡处理去除细胞：将步骤1)获取的甲床组织放置于摇床振荡器上进行振荡，并且将甲床组织依次浸泡于肝素PBS溶液中振荡40分钟～1.5小时、1％的Triton X‑100溶液中振荡3.5小时～4.5小时、PBS溶液中振荡40分钟～1.5小时、0.8％SDS溶液中振荡3.5小时～4.5小时、含有三种抗体的PBS溶液中振荡3.5小时～4.5小时获得去细胞甲床；其中，所述肝素PBS溶液是指肝素浓度为800～1200U/L的PBS溶液，所述含有三种抗体的PBS溶液是指含有80～120U/L青霉素、0.08～0.12mg/ml链霉素以及0.08～0.12mg/ml两性霉素B的PBS溶液；其中，振荡的速度为100～150转/分钟；步骤3)干燥处理：将步骤2)获得的去细胞甲床真空干燥处理至少6小时，再通过60Co‑γ射线灭菌处理至少2小时，其中60Co‑γ射线的辐射强度为10～15Krad。