[发明专利]一种能同时表达CD19 CAR和敲低T细胞表面PD-1表达的质粒结构及其构建方法在审
申请号: | 201810137112.X | 申请日: | 2018-02-10 |
公开(公告)号: | CN108424927A | 公开(公告)日: | 2018-08-21 |
发明(设计)人: | 张同存;顾潮江;潘丽娟 | 申请(专利权)人: | 武汉波睿达生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/63 | 分类号: | C12N15/63;C12N15/66 |
代理公司: | 北京汇泽知识产权代理有限公司 11228 | 代理人: | 张涛 |
地址: | 430074 湖北省武汉市东湖*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | 本发明涉及一种能同时表达CD19CAR和敲低T细胞表面PD‑1表达的质粒结构,包括依次串联的H1启动子、由H1启动子启动的抗PD‑1shRNA序列、EF1α启动子以及由EF1α启动子启动的三代CD19CAR序列;所述三代CD19CAR序列由CD19单链可变区、人CD8α铰链区、人CD28跨膜区和胞内区、人41BB胞内区、以及人CD3ζ胞内区串联构成。本发明所提供的质粒结构,将其用慢病毒转导进T细胞,比采用CRISPR/Cas9敲除PD‑1在生产CART细胞的工艺上简化了很大一步;并且这些CART细胞在体外受到抗原刺激后表现出了杀肿瘤细胞毒性的增强,细胞持久性的修复以及细胞因子分泌能力的上升。 | ||
搜索关键词: | 启动子 胞内区 质粒 细胞 细胞因子分泌 单链可变区 杀肿瘤细胞 抗原刺激 依次串联 持久性 铰链区 跨膜区 慢病毒 构建 敲除 体外 转导 串联 修复 表现 生产 | ||
【主权项】:
1.一种能同时表达CD19CAR和敲低T细胞表面PD‑1表达的质粒结构pLVX‑H1‑shRNA‑EF1α‑CD19,其特征在于,包括:依次串联的H1启动子、由H1启动子启动的抗PD‑1 shRNA序列、EF1α启动子以及由EF1α启动子启动的三代CD19 CAR序列;所述三代CD19 CAR序列由CD19单链可变区、CD8α铰链区、CD28跨膜区和胞内区、41BB胞内区、以及CD3ζ胞内区串联构成。
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