[发明专利]一种寄树兰再生体系快速建立及保存方法

摘要

本发明提供一种寄树兰再生体系快速建立及保存方法，属于植株再生研究领域。选取成熟蒴果，漂洗干净以及消毒处理后，纵切果实，镊子夹取种子，在无菌条件下诱导原球茎生长培养，得到原球茎；将原球茎切割为2‑3cm方块接种于芽增殖培养基中，得到增殖培养幼苗；将继代增殖诱导培养出来带叶2～3片，株高3～4cm无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中诱导生根20‑25d，得到可移栽的寄树兰幼苗。解决现有技术中寄树兰野生资源少，观赏效果好，自然繁衍能力、传播扩散能力不强，自然更新困难、优良种苗稀缺等问题，是国家二级保护植物，具有较高的园艺观赏价值，为兰科植物园林装饰以及兰花公园装饰具有重要意义。

主权项

1.一种寄树兰再生体系快速建立及保存方法，其特征在于：具体包括如下步骤：1）材料选取与消毒：采摘当年80‑90%成熟荚果用洗涤剂漂洗干净，再置于流水中冲洗20分钟；种子消毒处理：将荚果进行清洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min并用软毛刷刷洗荚果外部，冲洗干净后，自来水下滴冲0.5～1h，双蒸水冲荡2～3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞处理8～10min，将汞液倒入废汞瓶，无菌水冲3～4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分后即可进行接种；2）原球茎诱导培养：取饱满经消毒处理后的荚果，用枪状镊夹住荚果，手术刀顺着荚果垂直方向剖开，取出荚果内种子，分别接种于经高温、高压灭菌的原球茎诱导培养基中；培养条件：培养温度为23±2℃，无光培养79d后，第80d光照时间设置3h，光照强度500～1000lx,之后10d光照时间5h，光照强度500～1000lx，培养时间90d，得到生长原球茎；3）增殖培养：将经上述诱导培养，所得到原球茎切成2‑3cm方块，分别接种于芽增殖培养基中，光照时间8h/d，光照强度100～1500lx，增殖培养时间20‑30d，得到增殖培养幼苗；4）诱导生根：将步骤3）诱导培养带有叶2～3片、株高3～4cm无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中；光照时间10h/d，光照强度1500～2000lx，诱导生根时间20‑25d；5）试管苗培养完成：当诱导生根培养试管苗生长至高5‑6cm，根3～5条，叶5片，叶长2～3cm时完成寄树兰种子诱导发芽及快速繁殖培养；6）将完成生根培养试管瓶苗放在自然光下炼苗5～7天，打开瓶盖炼苗1‑2d，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出，洗净附着在根系的残留培养基，移入腐殖土：水草：碎树皮:碎石子质量比例为1:2:2:2混合的基质中，保湿遮阴，温度控制在15～30℃，湿度保持在75％～85％，避免阳光直射；2‑3周后植株适应能力逐渐增强，获得自然生长健壮完整种苗。