[发明专利]人泌乳素检测试剂盒及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种人泌乳素PRL均相检测试剂盒的制备方法，包括：制备包含受体及与之结合的第一结合单元的组分，受体能与单线态氧反应生成可检测信号，第一结合单元能结合PRL的第一表位；制备包含第一标记物及与之结合的第二结合单元第二组分，第二结合单元能结合PRL的第二表位，第二表位与第一表位是PRL的不同结合特性的表位或不同位置的相同结合特性的表位；制备包含供体以及与之结合的所述第一标记物的特异结合物的第三组分，供体能够在激发状态产生单线态氧。经该方法制备的试剂盒能够高效检测PRL。 1

主权项

1.一种人泌乳素均相检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

制备第一组分，所述第一组分包含受体以及与之结合的第一结合单元，所述受体能够与单线态氧反应生成可检测信号，所述第一结合单元能够结合人泌乳素的第一表位；

制备第二组分，所述第二组分包含第一标记物以及与之结合的第二结合单元，所述第二结合单元能够结合人泌乳素的第二表位，所述第二表位与所述第一表位是人泌乳素的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位；

制备第三组分，所述第三组分包含供体以及与之结合的所述第一标记物的特异结合物，所述供体能够在激发状态产生单线态氧。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

所述第一结合单元和所述第二结合单元分别独立选自与所述人泌乳素具有结合特异性的单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体、修饰的抗体、两种或更多种单克隆抗体混合物和多克隆抗体，优选选自多克隆抗体和/或单克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

所述标记物为生物素，所述标记物的所述特异结合物为链霉亲和素。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

所述受体包含烯烃化合物和金属螯合物，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；或，所述受体为填充有发光化合物和镧系元素的高分子微粒；和/或，

所述供体为光活化的或化学活化的敏化剂，其为非粒子形式，且在含水介质中可溶；和/或，所述供体为填充有感光化合物的高分子微粒，在光激发下能够产生单线态氧。

5.根据权利要求1‑4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括：

制备第一组合物，所述第一组合物包括所述第一组分和第一缓冲液；

制备第二组合物，所述第二组合物包括所述第二组分和第二缓冲液；

制备第三组合物，所述第三组合物包括所述第三组分和第三缓冲液；

优选地，所述第一缓冲液、所述第二缓冲液与所述第三缓冲液分别独立地选自pH 8.0，0.1M Tris‑HCl溶液。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述第一组合物的制备方法包括：

步骤S1，利用碳酸盐缓冲液将所述受体稀释至4～6mg/mL，获得受体溶液；

步骤S2，在所述受体溶液中加入第一抗人泌乳素抗体或其结合片段，静止后再加入用碳酸盐缓冲液稀释至8～12mg/mL的BSA溶液，获得与所述第一抗人泌乳素抗体或其结合片段结合的受体溶液；

步骤S3，分离与所述第一抗人泌乳素抗体或其结合片段结合的受体溶液中的与所述第一抗人泌乳素抗体或其结合片段结合的所述受体，并加入第一缓冲溶液，获得所述第一组合物。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述第二组合物的制备方法包括：

步骤T1，将第二抗人泌乳素抗体或其结合片段置于透析袋内利用标记缓冲液进行透析，透析结束后加入生物素溶液，并补入透析缓冲液，静止，获得与生物素结合的第二抗人泌乳素抗体或其结合片段；

步骤T2，将与生物素结合的第二抗人泌乳素抗体或其结合片段置于透析袋内利用透析缓冲液进行透析，透析结束后加入第二缓冲液，获得所述第二组合物。

8.一种用于均相检测人泌乳素的试剂盒，其是根据权利要1‑7中任一项所述的人泌乳素均相检测试剂盒的制备方法制备得到的。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：

所述第一组合物中的所述第一组分的浓度选自：10～300μg/mL，优选20～200μg/mL，更优选30～80μg/mL，和/或

所述第二组合物中的所述第二组分的浓度选自：0.5～15μg/mL，优选1～8μg/mL，更优选2～6μg/mL；和/或

所述第三组合物中的所述第三组分的浓度选自：10～300μg/mL，优选20～200μg/mL，更优选30～80μg/mL。

10.根据权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括人泌乳素校准品溶液，所述校准品溶液为浓度0μIU/mL、42.4μIU/mL、212μIU/mL、424μIU/mL、2120μIU/mL、4240μIU/mL系列的人泌乳素溶液。

11.一种人泌乳素均相检测的方法，其包括使用根据权利要8‑10中任一项所述的用于均相检测人泌乳素的试剂盒进行化学发光检测。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤R1，将待测样本与第一组合物和第二组合物混合，得到第一混合物；

步骤R2，将所述第一混合物与第三组合物混合，得到第二混合物；

步骤R3，使能量或者活性化合物与所述第二混合物接触，激发所述供体产生单线态氧，所述受体能够与接收到的所述单线态氧反应生成可检测的化学发光信号；

步骤R4，检测步骤R3中得到的化学发光信号的存在和/或强度，从而判断测待测样品中是否存在人泌乳素和/或确定人泌乳素的含量。

13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：利用所述人泌乳素校准品溶液制作化学发光信号‑人泌乳素浓度的标准曲线的步骤；所述标准曲线用于确定待测样本中人泌乳素的含量。

14.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，步骤R3中利用波长为600‑700nm的激发光照射所述第二混合物，激发所述供体产生单线态氧，所述受体与接触到的所述单线态氧反应生成波长为520‑620nm的发射光；步骤R4中，检测所述发射光的信号存在和/或强度，从而判断测待测样品中是否存在人泌乳素和/或确定人泌乳素的含量。

15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

a.在反应孔中加入10‑30μl待检样本；

b.在反应孔中依次加入10‑30μl所述第一组合物和10‑30μl所述第二组合物；

c.35‑45℃温育10‑30分钟；

d.向反应孔中加入所述第三组合物100‑250μl；

e.35‑45℃温育5‑20分钟；

f.利用波长为680nm的激光照射反应孔，激发供体产生单线态氧，受体与接触到的单线态氧反应可生成612nm的发射光；

g.检测每孔发射光的光子量，根据标准曲线计算人泌乳素的浓度。

16.一种根据权利要求11～15中任意一项所述的方法在定量检测待测样本中人泌乳素的存在与否和/或含量中的应用。