[发明专利]一种用于2，4，6-三硝基苯酚检测的分子印迹聚合物微球的制备方法

摘要

一种用于2，4，6‑三硝基苯酚检测的分子印迹聚合物微球的制备方法，其特征在于：2，4，6‑三硝基苯酚与N，N’‑二异丙基碳二酰亚胺反应生成的多硝基酚衍生物印迹分子具有亮黄色荧光，并且其荧光在酸碱条件下具有开闭特性，所述的分子印迹聚合物微球中洗脱位于印迹层中的印迹分子，印迹层的内形成具有与印迹分子结构、大小和功能基互补的空穴结构，洗脱印迹分子的聚合物微球具有对目标分析物分子的特异性识别位点，目标分子进入特异性识别位点，实现对目标分析物分子选择性识别，通过目标分子荧光的开闭实现对其敏感性检测，其分子印迹微球比表面积大，形成识别位点的空间结构稳定、有效位点多、对目标分子高选择性识别和高敏感检测。

主权项

1.一种用于2，4，6‑三硝基苯酚检测的分子印迹聚合物微球的制备方法，其特征在于：2，4，6‑三硝基苯酚与N，N’‑二异丙基碳二酰亚胺反应生成的多硝基酚衍生物具有亮黄色荧光，并且其荧光在酸碱条件下具有开闭特性，所述的分子印迹聚合物微球中洗脱位于印迹层中的印迹分子，印迹层的内形成具有与印迹分子结构、大小和功能基互补的空穴结构，洗脱印迹分子的聚合物微球具有对目标分析物分子的特异性识别位点，实现对目标分析物分子选择性识别和检测，上述分子印迹聚合物微球的制备过程包括如下四个步骤：1.1第一步是2，4，6‑三硝基苯酚衍生物合成：称取0.4～0.6 g处理后的2，4，6‑三硝基苯酚置于100 mL三口烧瓶中，随后加入7～8 mL二氯甲烷超声分散，再加入0.2 ~ 0.4 g的N，N’‑二异丙基碳二酰亚胺，溶液立即变成红棕色，氮气气氛下搅拌1 ~ 3 h，由于溶剂二氯甲烷的挥发，溶液变成粘稠状，在30 ~ 50 ℃真空干燥箱中干燥0.5 ~ 1.5 h得到红棕色固体粉末，具有亮黄色荧光特性，将20 mL的沸腾的甲醇溶液倒入上述制备的红棕色固体粉末中，再加入10 ~ 20 mL蒸馏水，置于0℃冰水混合液中进行水浴1 ~ 3 h，发现有红棕色晶体析出，将其过滤，即得到所要制备的2，4，6‑三硝基苯酚衍生物；1.2第二步是2，4，6‑三硝基苯酚衍生物提纯：把硅胶柱竖直安装在铁架台上，用丙酮和石油醚润洗3遍后，在250 mL烧杯中加入150 ~ 250g硅胶，用石油醚搅拌均匀，然后将其填充至硅胶柱里，开启气泵，向下对溶液加压，并用洗耳球敲打柱子，使硅胶震荡充实，待硅胶柱子的高度达到分离的要求时，将硅胶柱最上层保持水平，柱子敲实后，再加入石油醚，然后在利用气泵向下加压，如此操作3次，等到石油醚液面和硅胶柱面快齐平时，加入少量配制好的淋洗剂，自然下流，用胶头滴管吸取上述制备的2，4，6‑三硝基苯酚衍生物样品，沿着柱壁缓慢均匀上样，若样品量过多，用气泵向下加压，再接着上样，待分离样品全部上完后，用气泵将其压至与硅胶柱面齐平，上样结束后，再沿着柱壁慢慢加入事先配好的淋洗剂，最后得到2，4，6‑三硝基苯酚衍生物首先被分离出来的是橘红色液体（PAD1），其次是黄色液体（PAD2），用微量进样器分别取上述所得的液体5 ~ 15 uL滴加在硅胶板，确定分离提纯后，将所得到的PAD1和PAD2减压蒸馏，最后在50 ~ 70℃下真空烘箱中干燥7 ~ 9 h，最后分别得到橙黄色和棕黄色固体粉末；1.3第三步是目标分析物的分子印迹聚合物微球合成：用万分之一的电子天平分别称取20 ~ 40 mg橙黄色固体粉末PAD1，17 ~ 19 mg的丙烯酰胺，15 ~ 25 mg的偶氮二异丁腈，置于250 mL的锥形瓶中，然后用100 mL的量筒量取50 mL甲醇与乙腈体积比为9:1的混合液加入到上述锥形瓶中，超声分散5分钟左右，最后再用微量进样器量取190 ~ 210 μL的乙二醇二甲基丙烯酸酯滴加到上述溶液中，通20～30 min氮气后，在磨口塞均匀涂上真空脂，盖上锥形瓶，再用保鲜膜包裹，然后将锥形瓶放置于恒温振荡器中，在50 ~ 60 ℃下，振荡反应2 ~ 4 h，再将温度调至60 ~ 70℃下振荡反应8 ~ 10 h，最后70~ 85℃下，振荡反应1 ~ 3 h，取出冷却至室温，把反应混合溶液转移至15 mL离心管中，以5000 ~ 7000 rpm转速离心5 ~ 10 min，移去上清液，加入洗涤剂继续离心，超声分散、再离心，如此反复操作3次，得到印迹目标分子的分子印迹聚合物微球；1.4第四步是选择性识别和检测目标分析物的聚合物微球的制备：用乙酸与甲醇体积比为2:8的200 mL混合液在索氏提取器中洗脱上述的所得到的分子印迹聚合物微球中的模板分子，直至洗脱液中没有荧光信号为止，得到了对目标分析物分子选择性识别和光学信号检测的聚合物微球。