[发明专利]一种高转化率运动发酵单胞菌及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 201810155566.X | 申请日： | 2018-02-23 |
| 公开（公告）号： | CN108300732A | 公开（公告）日： | 2018-07-20 |
| 发明（设计）人： | 刘晨光;夏娟;闻远;曹莲莹;李凯;白凤武 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/54;C12N1/21;C12R1/01 |
| 代理公司： | 上海旭诚知识产权代理有限公司 31220 | 代理人： | 郑立 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高转化率运动发酵单胞菌的构建方法；同时本发明还涉及一种高转化率运动发酵单胞菌；第三方面本发明还涉及一种高转化率运动发酵单胞菌在基因工程领域的应用。构建方法包括：结合参考文献及数据库对运动发酵单胞菌Zymononas mobilis ZM4全基因组限制‑修饰系统相关基因进行预测；对预测到的两个和限制修饰系统相关的基因分别设计基因敲除引物，以ZM4和ZM401为出发菌株，通过质粒pEX18Tc敲除掉相关基因，最终得到的ZM4m和ZM401m为限制‑修饰系统相关基因敲除菌株。本发明所得菌株的转化效率明显提高，获得的转化子数目多，阳性率高，在生长性能和发酵性能方面和野生型菌株无异。以双敲除菌株作为出发菌株更有利于运动发酵单胞菌的分子改造及相关的机理研究。 | ||
| 搜索关键词： | 运动发酵单胞菌 高转化率 相关基因 构建 菌株 敲除 出发菌株 修饰系统 基因工程领域 限制修饰系统 野生型菌株 发酵性能 分子改造 机理研究 全基因组 设计基因 生长性能 转化效率 阳性率 转化子 除掉 引物 预测 质粒 应用 数据库 参考 基因 | ||
【主权项】：
1.一种具有高转化效率的运动发酵单胞菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)结合参考文献及数据库KEGG，预测运动发酵单胞菌ZM4和ZM401全基因组限制‑修饰系统(R‑M system)相关基因；2)对预测到的两个所述限制‑修饰系统相关基因分别设计敲除引物；3)分别以ZM4和ZM401为出发菌株，敲除掉所述限制‑修饰系统相关基因，得到所述菌株ZM4△1933、ZM4△0028、ZM401△1933、ZM401△0028；4)以ZM4△0028为所述出发菌株，再敲除ZMO1933基因，得到ZM4△0028△1933双敲除菌株，即ZM4m；以ZM401△1933为所述出发菌株，再敲除ZMO0028基因，得到ZM401△0028△1933双敲除菌株，即ZM401m。
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