[发明专利]直接检测茶叶糖苷结合态香气前体物质的方法

摘要

本发明公开了一种可直接同时检测茶叶糖苷结合态香气前体物质的方法，以茶鲜叶、茶在制品、或成品茶作为待测样品，依次进行以下步骤：1)、待测样品中糖苷结合态香气前体提取，2)、提取物中糖苷结合态香气前体UPLC‑MS/MS分析，3)、茶叶糖苷结合态香气前体物质含量计算：以4‑硝基苯基‑β‑D‑葡萄糖苷内标为参照，获得苯甲醇樱草糖苷、水杨酸甲酯樱草糖苷、苯乙醇樱草糖苷、顺3‑己烯醇樱草糖苷、芳樟醇氧化物I樱草糖苷、芳樟醇氧化物II樱草糖苷、芳樟醇氧化物樱草糖苷III、芳樟醇樱草糖苷、香叶醇樱草糖苷这9种糖苷结合态香气前体的物质含量。该方法对糖苷结合态香气前体物质检测效率高。

主权项

1.直接检测茶叶糖苷结合态香气前体物质的方法，其特征是：以茶鲜叶、或茶在制品、或成品茶作为待测样品，依次进行以下步骤：1)、待测样品中糖苷结合态香气前体提取：将0.05‑0.1g干重的待测样品利用20mL提取剂进行提取，提取液经离心，得上清液；所述提取剂为预冷的体积浓度为90‑95％甲醇；在上清液中添加3μg 4‑硝基苯基‑β‑D‑葡萄糖苷作为内标，并加入0.1‑0.2g经超纯水预溶胀的不溶性聚乙烯吡咯烷酮PVPP充分混匀，静置后离心，离心所得的上清浓缩至干，得浸膏；将浸膏溶于1‑2mL超纯水中，并过0.22μm微孔滤膜，得茶叶糖苷结合态香气前体提取物；2)、提取物中糖苷结合态香气前体UPLC‑MS/MS分析：以UPLC HSST3色谱柱为分析柱，柱温35℃，进样量5ul；以甲酸/水(0.05/99.95，v/v)为流动相A、以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，流速为0.3ml/min，洗脱时间程序为0‑3min B相保持10％、3.01‑15min B相从10％增加至20％、15.01‑20min B相从20％增加至35％、20.01‑22min B相从35％增加至90％、22.01‑24min B相保持90％、24.01‑26min B相保持10％；MS分析条件为：电喷雾ESI负电离模式、毛细管电压3KV、二级锥孔电压3V、透镜电压0.2V、离子源温度150℃，脱溶剂气温度500℃、脱溶剂气流量800L/h、锥孔气流量60L/h、锥孔电压25V、碰撞气氩气流速0.25mL/min、扫描质荷比范围为100～700m/z、数据采集时间为26min；在4‑9min对应的通道1中以离子对346/138检测内标4‑硝基苯基‑β‑D‑葡萄糖苷、以离子对447/269检测苯甲醇樱草糖苷、以离子对491/293检测水杨酸甲酯樱草糖苷，在7‑13min对应的通道2中以离子对461/149检测苯乙醇樱草糖苷、以离子对439/149检测顺3‑己烯醇樱草糖苷、以离子对509/331检测芳樟醇氧化物(I和II)樱草糖苷，在13‑17min对应的通道3中以离子对509/331检测芳樟醇氧化物III樱草糖苷，在17‑23min对应的通道4中以离子对493/161检测芳樟醇樱草糖苷、以离子对493/149检测香叶醇樱草糖苷；3)、茶叶糖苷结合态香气前体物质含量计算：以4‑硝基苯基‑β‑D‑葡萄糖苷内标为参照，获得苯甲醇樱草糖苷、水杨酸甲酯樱草糖苷、苯乙醇樱草糖苷、顺3‑己烯醇樱草糖苷、芳樟醇氧化物I樱草糖苷、芳樟醇氧化物II樱草糖苷、芳樟醇氧化物樱草糖苷III、芳樟醇樱草糖苷、香叶醇樱草糖苷这9种糖苷结合态香气前体的物质含量。