[发明专利]一种利用SCAR分子标记进行烟草品种鉴别的方法

摘要

本发明属于烟草生物技术领域，具体涉及一种利用SCAR分子标记进行烟草品种鉴别的方法。该方法包括：设计SCAR引物、提取待鉴定烟草基因组DNA、PCR扩增、初步分组、RAPD分子标记、建立对应的分子ID等步骤。本申请以具体的53个烟草品种为例，利用较为成熟的SCAR分子标记和RAPD分子标记技术，建立了特征性的分子ID，可为烟草指纹图谱库的建立奠定良好基础。总体而言，本申请具有鉴定快速、结果准确、重复性较好的技术优势，可为烟草配方中烟草品种的鉴定和烟支质量的稳定鉴定良好基础，能够缓解烟叶品种不真实或品种混杂造成的卷烟配方失真、卷烟品质波动、卷烟风格变化等技术问题，因而具有较好应用价值。

主权项

1.一种利用SCAR分子标记进行烟草品种鉴别的方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：（1）设计2对SCAR引物，引物序列如SEQ ID NO.1~4所示，具体如下：S4‑1：5’‑GGTGCACTCTCAGTACAATCTGC‑3’，S4‑2：5’‑CCAGTTCGATGTAACCCACTCG‑3’；S8‑1：5’‑GATTTTGGGTCCCCGGAATCCCG‑3’，S8‑2：5’‑GTGGTGACACTCGTCATATAGC‑3’；（2）提取待鉴定烟草基因组DNA，以所提取DNA为模板，利用步骤（1）中的SCAR引物进行PCR扩增，并对PCR扩增产物进行电泳检测分析，据此对待鉴定烟草进行初步分组；所述待鉴定烟草品种，应属于但不限于如下所述53个烟草品种；依据利用步骤（1）中2对SCAR引物PCR扩增时特异性条带有无的组合情况，将53个烟草品种分为10、11、00、01四组，其中：0表示未出现特征条带，1表示出现特征条带，具体分组情况如下：10组：红花大金元、延晒2号、延晒8号、延晒10号、吉烟5号、NC71、翠碧1号；11组：云烟85、云烟98、云烟203、云烟317、延晒1号、延晒6号、吉烟1号、吉烟7号、吉烟10号、吉烟9号、豫烟10号、龙江911、龙江925、龙江982、K346、SAM、9407；00组：云烟87、云烟100、云烟105、云烟202、延晒7号、豫烟6号、豫烟7号、豫烟11号、中烟100、龙江981、NC297、CT1410、GR17；01组：云烟97、云烟99、云烟116、延晒3号、延晒4号、延晒5号、延晒9号、益延1号、延安1号、豫烟12号、中烟206、K326、NC89、NC102、秦烟96、V2；（3）利用RAPD分子标记技术，对步骤（2）中初步分组后的组内烟草进行分子标记，建立对应的分子ID；具体而言：对步骤（2）中初步分组后的每个小组的组内烟草进行若干轮RAPD‑PCR，并对扩增产物进行电泳检测分析，根据电泳结果对小组内相关品种进行鉴定，最终得到4个小组中不同品种的分子ID。