[发明专利]一种具有生物活性的胶原的质量控制方法

摘要

本发明公开了一种具有生物活性的胶原的质量控制方法。本发明采用酸性酶解的条件实现了对牛筋腱I型胶原的高效提取，优化胶原的生产工艺，通过改变酶反应时间、透析时间以及透析袋截留分子量大小，控制胶原的分子量及分子量分布；通过去端肽控制胶原的免疫原性；通过透射电镜表征胶原的三螺旋结构确定胶原的生物活性，所制备的活性I型胶原蛋白已达到国际水平，为胶原的进一步应用提供了基础。

主权项

1.一种具有生物活性的胶原的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)筋腱预处理：对动物筋腱进行脱脂、切片和消毒处理；(2)胶原的提取：将经步骤(1)预处理后的筋腱进行粉碎，在粉碎的筋腱中加入0.5～1.0mol/L的乙酸和1000～3000U/L的胃蛋白酶进行酶解，去除端肽，酶解温度为10℃～30℃，酶解反应时间为48～144h，离心后取上清液；(3)胶原的纯化：将步骤(2)中的上清液进行盐析和沉淀处理，将沉淀再次用0.1～0.5mol/L的乙酸或0.05～0.1mol/L的盐酸酸解，离心取上清液，并进行脱盐处理，得到胶原溶液；(4)透析：将胶原溶液装入透析袋中，透析袋的截留分子量为50～100kDa，用纯化水或pH 4.5～5.0的醋酸盐缓冲液作为透析外液，透析2～5天，得到所述具有生物活性的胶原原液。