[发明专利]一种快速分离甘蔗宿根矮化病致病菌Lxx的方法

摘要

本发明公开了一种快速分离甘蔗宿根矮化病致病菌Lxx的方法。采用FeSO4和FeCl3制得磁性纳米颗粒，加入3‑氨丙基三乙氧基硅烷，调pH值，搅拌；洗涤干燥，得到氨基化的Fe3O4纳米粒子；再加入戊二醛反应，加入Lxx多克隆抗体后搅拌，洗涤后用磁石收集；将过滤后的蔗汁加入其中混匀后孵育，离心弃上清，用PBS缓冲液清洗后获得Lxx。本发明方法具有分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单、不需要昂贵的仪器设备、污染率低等优点，更重要的是可在不改变细菌状态下快速将Lxx病原菌从甘蔗中分离出来，用于研究在当下状态下细菌的转录组和代谢组，解决了细菌与病原菌互作过程中无法快速获得大量病原菌的问题。

主权项

1.一种快速分离甘蔗宿根矮化病致病菌Lxx的方法，其特征在于，包括如下步骤：纳米磁珠的制备：取FeSO4和FeCl3混合倒入三口烧瓶置于恒温加热磁力搅拌器上，在充氮气的条件下搅拌到溶解，调pH值至为8‑10，溶液立即变为黑色，继续反应，制得磁性纳米颗粒；置于磁场中弃上清液后，用去离子水洗涤后干燥；纳米磁珠的氨基化：取上述所得磁性纳米颗粒，溶解在无水乙醇中，超声波处理至完全分散，加入3‑氨丙基三乙氧基硅烷，调节pH值为10‑12，在水浴中搅拌反应过夜；结束后用去离子水反覆洗涤后冷冻干燥，得到氨基化的Fe3O4纳米粒子；氨基化纳米磁珠活化：取上述所得氨基化的Fe3O4纳米粒子溶于PBS，超声得到分散性好的磁珠溶液，加入戊二醛，于室温下搅拌反应；再PBS洗涤后用磁石收集，定容，得到活化后的氨基化纳米磁珠；Lxx免疫磁珠的制备：将Lxx多克隆抗体加入到上述所得活化后的氨基化纳米磁珠中后搅拌，再用PBS洗涤后用磁石收集得到Lxx免疫磁珠；Lxx的分离：将过滤后的蔗汁加入到所得Lxx免疫磁珠中混匀后孵育，低速离心弃上清，用PBS缓冲液清洗后获得Lxx的分离物。