[发明专利]基于实时荧光定量PCR技术的脊肌萎缩症致病基因SMN1拷贝数检测试剂盒及方法

摘要

本发明公开了一种基于实时荧光定量PCR技术的脊肌萎缩症致病基因SMN1拷贝数检测试剂盒及方法，其中包括一对目的基因SMN1基因7号外显子锁核酸修饰的特异引物SMN1‑F(SEQ ID NO.1)和SMN1‑R(SEQ ID NO.2)、SMN1检测探针(SEQ ID NO.3)、SMN‑P锁核酸修饰以及3’端C3Spacer修饰的SMN2基因封闭探针SMN2‑B(SEQ ID NO.4)、内参基因ALB基因引物ALB‑F(SEQ ID NO.5)和ALB‑R(SEQ ID NO.6)、ALB检测探针ALB‑P(SEQ ID NO.7)。通过锁核酸修饰增强SMN1基因扩增特异性及扩增效率，运用多重PCR原理，通过优化反应体系和条件，建立目的基因、内参基因双重扩增的稳定反应体系，可保证SMN1拷贝数定量的精确性和可靠性，重复性好，可操作性强。

主权项

1.基于实时荧光定量PCR技术的脊肌萎缩症致病基因SMN1拷贝数检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括如下引物和探针：引物：SMN1‑F:ATAAAGCTATCTATATATAGCTATCTAT/LNA_G/；引物：SMN1‑R:CCTTCTTTTTGATTTTGTCT/LNA_G/；探针：SMN‑P:FAM‑ACCCTGTAAGGAAAATAAAGGAAGT‑MGB；封闭探针：SMN2‑B:TTCTTTTTGATTTTGTC/LNA_T//LNA_A/AAACCC‑C3Spacer；引物：ALB‑F:CCCAGGTTCAAGCCATTCTC；引物：ALB‑R:GACTCTGTCACTTACTGGCGTTT；探针：ALB‑P:CY5‑CCTGTTCTTTAGCTATCCGTG‑MGB。其中，SMN1上游引物SMN1‑F序列3’端第一位碱基G为锁核酸修饰碱基；SMN1下游引物SMN1‑R序列3’端第一位碱基G为锁核酸修饰碱基；SMN2封闭探针SMN2‑B3’端第七位A、第八位碱基T为锁核酸修饰碱基，3’端C3Spacer修饰。