[发明专利]一种栝楼嫩叶的组培育苗方法

摘要

一种栝楼嫩叶的组培育苗方法，包括外植体抗褐化、消毒处理、叶片愈伤组织诱导培养、丛生芽诱导分化及继代增殖、生根培养和瓶苗移栽等技术环节。本法是以刚萌发的带叶柄嫩叶为外植体，先后用维C、高锰酸钾水溶液浸泡消毒的处理方式，降低外植体褐化率和污染率，使外植体初诱导接种成活率达95%；通过在培养基中添加活性炭和聚乙烯吡咯烷酮来吸附和抑制有害物质，达到提高外植体分化率、降低褐变率的效果。本发明首次采用细胞分裂素与生长组合后直接诱导叶片分化愈伤组织，减少先诱导不定芽分化的环节，提高组培育苗效率；采用苗床覆盖小拱棚的方式定植瓶苗，移栽成活率达90%以上。本方法可为栝楼良种工厂化育苗利用提供技术支撑。

主权项

1.一种栝楼嫩叶的组培育苗方法，其特征在于包含以下步骤：（1）外植体消毒： 采集刚萌发5～10天的栝楼带叶柄嫩叶做外植体；冲洗干净后，用3000mg.L‑1维生素C蒸馏水溶液浸泡40min，然后用2500 mg.L‑1高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡30min，用蒸馏水冲洗3～5次，再用1000 mg.L‑1氯化汞水溶液常规消毒10min，蒸馏水冲洗5次；（2）组织培养条件的设定： 各阶段的基本培养基均为：1/2MS+12 g.L‑1琼脂+30 g.L‑1蔗糖，pH值6.0；培养条件为：温度24℃～26℃，光照为1500～2000Lux，光照时间为12～14h/d；（3）愈伤组织诱导培养： 将消毒后外植体的叶柄插入培养基中，叶片部分出露，诱导叶片分化愈伤组织；培养30天后，可产生直径1.5cm的绿色疏松愈伤组织；培养基配方：基本培养基+1.0 g.L‑1活性炭+1.0 g.L‑1 聚乙烯吡咯烷酮+1.0 mg.L‑1噻苯隆+ 0.1 mg.L‑12,4‑二氯苯氧乙酸+ 0.5 mg.L‑1 萘乙酸；（4）丛生芽诱导培养： 将初诱导培养产生的愈伤组织分成直径0.5cm的小块后接种到丛生芽诱导培养基上；培养35天后，每块可分化5～8个丛生芽；基本培养基配方：+1.0 g.L‑1 活性炭+1.0 g.L‑1 聚乙烯吡咯烷酮+2.0 mg.L‑1 6‑卞氨基嘌呤+ 0.1 mg.L‑1 噻苯隆+0.2 mg.L‑1 萘乙酸；（5）丛生芽继代增殖培养： 将高度1.0cm以下丛生芽分割成带愈伤组织小块的单株后接种到继代增殖培养基上，培养20天后，可产生5个以上丛生芽；基本培养基配方：+1.0 g.L‑1活性炭+1.0 g.L‑1聚乙烯吡咯烷酮+2.0 mg.L‑16‑卞氨基嘌呤+0.5 mg.L‑1萘乙酸；（6）生根诱导培养： 将继代增殖形成的丛生芽分割成单株后接种到生根培养基上，培养20天后开始产生根系；基本培养基配方： +500 mg.L‑1花宝1号+ 1.0 g.L‑1活性炭+1.2 mg.L‑1 吲哚丁酸 +0.1 mg.L‑1 6‑卞氨基嘌呤；（7）瓶苗移栽：将瓶苗进行炼苗培养；同时将基质处理后装入营养袋中；将炼苗后的瓶苗取出，洗净根系后置于有少量水分的磁盘中，将幼苗植入已消毒装袋的基质中，每袋1株；将植苗营养袋挨个放入泥底苗床中，然后浇透水，搭棚遮阴，完成幼苗移栽。