[发明专利]黑根霉胞外多糖在制备治疗诱发性结肠癌药物中的应用

摘要

本发明提供了黑根霉胞外多糖在制备治疗诱发性结肠癌药物中的应用。黑根霉胞外多糖是黑根霉经活化、发酵培养、乙醇沉淀、Sevage法脱蛋白、大孔树脂脱色等进一步分离纯化获得。本发明利用黑根霉胞外多糖通过建立AOM/DSS诱导性结肠癌小鼠模型和DMH诱导性大鼠结肠癌模型对黑根霉胞外多糖的抗肿瘤活性进行探究。动物模型实验结果表明：黑根霉胞外多糖可以明显抑制诱发性结肠癌小鼠肿瘤的生长和发展，并对诱导性结肠癌有显著预防和治疗作用。同时可以提高小鼠健康状态、小鼠成活率，延缓死亡。

主权项

1.一种黑根霉胞外多糖在制备治疗诱发性结肠癌药物中的应用，其特征在于，所述的黑根霉胞外多糖的制备方法如下：(1)取菌种保藏号为CGMCC N0.8436的黑根霉菌种接种于PDA培养基中，28±0.5℃活化2‑3天后转接至PDB培养基中，在28±0.5℃，100‑150rpm/min条件下，连续培养10‑12天得发液；(2)将制备的发酵液以抽滤方法除去菌丝和孢子进行固液分离，将分离后的液体浓缩至原有培养液体积的1/3‑1/2；离心收集浓缩液，在收集的浓缩液中加入其3倍体积的无水乙醇静置过夜；离心收集沉淀并用蒸馏水充分溶解，取上清液得粗提液；(3)将步骤(2)制备的上清液流过装有D301‑R型树脂的脱色柱，每次上样200mL，流速为420μL/min，收集脱色后的澄清液；(4)在步骤(3)制备的澄清液中加入总体积1/4的Sevege试剂置于恒温混匀振荡器中反复多次除去蛋白质，之后以蒸馏方法除去澄清液中的有机溶剂，得到粗多糖溶液；(5)粗多糖溶液冻干后再经DEAE Sepharose fast flow阴离子交换层析初步分离，得到EPS1；(6)采用Sephadex G‑100和Sephadex G‑75葡聚糖凝胶柱层析对DEAE Sepharose fast flow初步分离的多糖EPS1组分进一步分离纯化，得到后续使用的黑根霉胞外多糖EPS1‑1。