[发明专利]一种基于免疫磁分离技术和生物发光技术的大肠杆菌的检测方法在审
| 申请号： | 201810224936.0 | 申请日： | 2018-03-19 |
| 公开（公告）号： | CN108507987A | 公开（公告）日： | 2018-09-07 |
| 发明（设计）人： | 王春兴;张志杰;杨志政;韩旭;徐元达 | 申请（专利权）人： | 山东师范大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 张晓鹏 |
| 地址： | 250014 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于免疫磁分离技术和生物发光技术的大肠杆菌的检测方法，包括如下步骤：1)将生物素与大肠杆菌抗体偶联，得到生物素化的大肠杆菌抗体；2)生物素化的大肠杆菌抗体和链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒混合，制备磁性纳米探针；3)使用PBS缓冲液冲洗磁性纳米探针后，将磁性纳米探针加入到大肠杆菌溶液中，使大肠杆菌被磁性纳米探针捕获；4)捕获大肠杆菌后的溶液置于离心管中，将捕获有大肠杆菌的磁性纳米探针进行富集；5)采用清洗液对富集的样品进行清洗，得到用于ATP发光的溶液，磁性纳米探针被磁性分离架富集分离；向裂解后的溶液中加入荧光素和Mg2+，通过检测溶液的荧光强度，计算得到大肠杆菌的数量。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 磁性纳米探针 大肠杆菌抗体 捕获 免疫磁分离 生物发光 生物素化 富集 检测 磁性纳米颗粒 大肠杆菌溶液 制备磁性纳米 磁性分离架 链霉亲和素 富集分离 离心管 清洗液 生物素 荧光素 荧光 裂解 偶联 探针 修饰 冲洗 发光 清洗 | ||
【主权项】：
1.一种基于免疫磁分离技术和生物发光技术的大肠杆菌的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：1)将生物素与大肠杆菌抗体偶联，得到生物素化的大肠杆菌抗体；2)生物素化的大肠杆菌抗体和链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒混合，制备磁性纳米探针；3)使用PBS缓冲液冲洗磁性纳米探针后，将磁性纳米探针加入到大肠杆菌溶液中，培养，使大肠杆菌被磁性纳米探针捕获；4)捕获大肠杆菌后的溶液置于离心管中，在离心管的一侧放置磁性分离架，将捕获有大肠杆菌的磁性纳米探针进行富集；5)采用清洗液对步骤4)中富集的样品进行清洗，得到用于ATP发光的溶液，磁性纳米探针被磁性分离架富集分离；6)向步骤5)中得到的用于ATP发光的溶液中加入ATP擦除剂设定时间后，去除溶液中体细胞和游离ATP，再加入细菌裂解剂，对大肠杆菌进行裂解；7)向步骤6)中裂解后的溶液中加入荧光素和Mg2+，通过检测溶液的荧光强度，计算得到大肠杆菌的数量。
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