[发明专利]一种基于镉诱导H9-CMS细胞模型的心肌保护药物筛选方法

摘要

本发明提供了一种基于镉诱导H9‑CMS细胞模型的心肌保护药物筛选方法。针对人类心肌细胞的CIC尚未研究的现状，首先利用H9胚胎干细胞诱导培养心肌细胞，然后向心肌细胞同时添加待筛选药物和氯化镉；通过与仅添加氯化镉的对照组做对比，分析待筛选药物的性能。本发明表明，hPSC‑CMs的细胞模型可以在体外实验中验证CIC，本发明发现镉诱导后ROS升高，随后ROS的积累诱导下游信号一系列变化，导致心肌细胞活性降低、细胞凋亡和细胞功能障碍，本发明发现PI3K/Akt和p38MAPK信号通路在CIC中起重要作用，本发明的研究可以用来寻找新的心肌保护药物并研究其分子基础。

主权项

1.一种基于镉诱导H9‑CMS细胞模型的心肌保护药物筛选方法，其特征在于包括如下步骤：1)将H9胚胎干细胞进行培养，待H9细胞长到培养皿的80％以后，用1640‑insulin培养基润洗一次，所述的1640‑insulin培养基为1640培养基加B27minus Insulin；然后加入1640‑insulin培养基，加入ChIR使其浓度为6μM，过24小时以后在原有培养基上补充1640‑insulin培养基；再过24小时换液，加入1640‑insulin培养基；24h以后换液，然后加入1640‑insulin培养基，加入IWR使其浓度为8μM，24h以后在原有培养基上补充1640‑insulin培养基；后续两天每天用1640‑insulin培养基换液；最后经过24小时以后换液，加入1640+insulin培养基，所述的1640+insulin培养基为1640培养基加B27Insulin；得到心肌细胞H9‑CMS；2)以向心肌细胞H9‑CMS同时添加待筛选药物和氯化镉为筛选组，以向心肌细胞H9‑CMS仅添加氯化镉为对照组，不对心肌细胞H9‑CMS做处理做空白组，筛选组和对照组处理心肌细胞H9‑CMS24小时，其中筛选组和对照组中氯化镉的浓度相同，所述的氯化镉的浓度范围为10μM‑100μM；根据TUNEL染色和电生理结果评估待筛选药物。