[发明专利]从螺旋藻中萃取藻蓝蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种从螺旋藻中萃取藻蓝蛋白的方法，其包括：(1)取新鲜或干燥的螺旋藻的藻体于液氮中研磨形成螺旋藻粉，形成螺旋藻粉悬浊液；(2)向螺旋粉悬浊液中加入木瓜蛋白酶和糖化酶组成的复合酶，弃上清液，获得沉淀物；(3)将步骤(2)中获得的沉淀物分级沉淀，透析除盐，获得盐析剩余物；(4)将盐析剩余物清洗之后加入含三氯乙酸和疏基乙醇的丙酮溶液超声混合后静置，之后经两次离心处理，冷冻干燥沉淀。本发明提供的从螺旋藻中萃取藻蓝蛋白的方法，流程工艺简单，易于规模化生产；相较于传统提取方法，本发明提供的方法藻蓝蛋白的获取率高，所获得的藻蓝蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳中形成条带数目多，质量高。 1

主权项

1.一种从螺旋藻中萃取藻蓝蛋白的方法，其特征在于包括：

(1)取新鲜或干燥的螺旋藻的藻体于液氮中研磨形成螺旋藻粉，并加入螺旋藻粉2‑3倍质量的磷酸盐缓冲液形成螺旋藻粉悬浊液；

(2)向所述螺旋粉悬浊液中加入木瓜蛋白酶和糖化酶组成的复合酶，先于pH为4‑6、30‑45℃水浴超声溶解0.5‑1.5h，再95‑105℃水浴灭酶0.5‑0.8h，然后60‑80℃水浴浸提，弃上清液，获得沉淀物；

(3)将步骤(2)中获得的沉淀物采用30‑50％的硫酸盐和磷酸盐形成的混合溶液分级沉淀，透析除盐，获得盐析剩余物；

(4)将所述盐析剩余物加‑3‑0℃去离子水反复清洗2‑3次，之后加入含三氯乙酸和疏基乙醇的丙酮溶液超声混合后于‑20‑‑10℃静置1‑2h，之后以1200‑1500r/min的转速进行第一次离心处理20‑40min；弃上清液、加入疏基乙醇的丙酮溶液于‑20‑‑10℃静置1‑2h，之后以1200‑1500r/min的转速进行第二次离心处理20‑40min，弃上清液、冷冻干燥沉淀；所述沉淀即藻蓝蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述复合酶的体积浓度为0.5％～1％。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述复合酶中木瓜蛋白酶和糖化酶的质量比为1:1‑1.5。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述硫酸盐包括硫酸铵和硫酸钠；所述磷酸盐包括磷酸铵和磷酸钠。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)中所述盐析剩余物与含三氯乙酸和疏基乙醇的丙酮溶液的用量比为0.3‑0.5g：1‑1.3mL。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述三氯乙酸的质量体积比浓度为8‑12％；所述疏基乙醇的体积分数为0.05‑0.1％。