[发明专利]一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法

摘要

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法，所述方法步骤包括：S1、种子细胞的制备；S2、三级在线放大培养；S3、病毒接种；S4、病毒培养与收获。与现有技术相比，本发明能显著降低生产成本，大规模生产高滴度的鸡传染性法氏囊病病毒，同时还能使细胞在传代时保持较高的细胞增殖速率，减少血清残留对终产品的不良影响。

主权项

1.一种在线放大生产鸡传染性法氏囊病病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、种子细胞的制备：取贴壁细胞进行转瓶培养得到种子细胞，当细胞数量达到0.65‑1.30×1010cells时进行三级在线放大培养；S2、三级在线放大培养：取步骤S1所得种子细胞或单层细胞至生物反应器进行三级在线放大培养，添加微载体3‑5g/L，培养液占生物反应器总体积65‑75％，设置细胞贴壁参数为：DO：40‑50、pH：7.2‑7.3、温度：32‑37℃、转速：30‑100转/min、O2：0.2‑0.4MPa/(L/min)/min、CO2：0.2‑0.6MPa/(L/min)/min、Air：0.2‑0.4MPa/(L/min)/min；3‑4h后切换为细胞培养参数：DO：40‑60、pH：7.0‑7.5、温度：35‑38℃、转速：30‑80转/min、O2：0.2‑0.4MPa/(L/min)/min、CO2：0.2‑0.6MPa/(L/min)/min、Air：0.2‑0.4MPa/(L/min)/min、灌流量为生物反应器总体积25‑65％每天；S3、病毒接种：当细胞密度为2.58‑4.73×108cells/g微载体时，用PBS清洗载体，去除培养液和血清，将病毒液及清洗后的细胞液加入到含有无牛血清DMEM/F12培养液的罐体中，感染细胞，设置病毒吸附参数：DO：30‑40、pH：7.40‑7.80、温度：33‑37℃、转速：30‑50转/min、O2：0.2‑0.3MPa/(L/min)/min、CO2：0.2‑0.4MPa/(L/min)/min、Air：0.2‑0.4Mpa/(L/min)/min；S4、病毒培养与收获：病毒吸附1‑2h后换成病毒培养参数，设置病毒培养参数：DO：30‑50、pH：7.35‑7.40、温度：33‑37℃、转速：40‑60转/min、O2：0.2‑0.3MPa/(L/min)/min、CO2：0.2‑0.4MPa/(L/min)/min、Air：0.2‑0.4MPa/(L/min)/min，当出现70‑85％细胞病变时收获病病毒液。