[发明专利]一种检测保健品中苯二氮卓类物质的检测卡及其制备方法

摘要

本发明涉及一种免疫胶体金检测卡技术领域，公开了一种检测保健品中苯二氮卓类物质的检测卡，检测卡包括检测试纸条，检测试剂条从样品垫(1)开始依次为金标结合垫(2)、硝酸纤维素膜(3)、吸水垫(4)，金标结合垫(2)为包被有胶体金标记的抗苯二氮卓单克隆抗体的玻璃纤维垫片，硝酸纤维素膜(3)为设有检测线(5)和质控线(6)的硝酸纤维素膜，检测线(5)上包被有苯二氮卓‑牛血清白蛋白复合物，质控线(6)上包被有羊抗鼠IgG。本发明还进一步公开了检测保健品中苯二氮卓类物质的检测卡的制备方法。本发明可避免使用复杂辨识剂或追迹缓冲液的麻烦，从而减少样品差异，提高灵敏度。

主权项

1.一种检测保健品中苯二氮卓类物质的检测卡的制备方法，检测卡包括检测试纸条，检测试纸条的底层为底衬，底衬上依次粘贴有样品垫(1)、金标结合垫(2)、硝酸纤维素膜(3)及吸水垫(4)，硝酸纤维素膜(3)上设有检测线(5)和质控线(6)，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，制备浓度为1％的氯金酸水溶液和浓度为1％的柠檬酸三钠水溶液，将装有100mL超纯水的圆底烧瓶置于油浴恒温器上，边加热边搅拌，当水温达到95℃时加入2mL氯金酸水溶液，煮沸2min，再加入柠檬酸三钠水溶液，保持溶液沸腾10min，冷却至室温，制得粒径为28～32nm的胶体金颗粒溶液；步骤二，在步骤一所得的胶体金颗粒溶液中加入0.1mol/L碳酸钾水溶液，将胶体金颗粒溶液的pH调至8.2～8.5，室温搅拌12min，加入1mg苯二氮卓单克隆抗体，室温搅拌30min，加入25mL质量分数为10％的牛血清蛋白，室温搅拌30min后装入离心管，在温度为8℃，先在低转速为5000rpm下离心10min，之后在中转速8000rpm下离心20min，最后在转速为12000rpm下离心25min，弃上清液，留沉淀，沉淀中加入pH为8.2的缓冲液稀释至2mL，得到胶体金溶液，用胶体金溶液喷涂玻璃纤维垫片，制得金标结合垫(2)；步骤三，在湿度为45～65％下，用pH值为8.2、浓度为10mM的PBS溶液配制1mg/mL羊抗鼠多克隆抗体溶液及1mg/mL苯二氮卓‑牛血清蛋白，将喷膜仪中分别装入已配制好的10mL苯二氮卓‑牛血清蛋白和10mL羊抗鼠多克隆抗体溶液，开始喷膜，喷后的硝酸纤维素膜(3)移入37℃恒温干燥箱中干燥10h后取出，得到膜孔径为3～5μm的硝酸纤维素膜(3)；步骤四，制备质量分数为1％的异戊醇水溶液，在湿度为75％下，将步骤三所制备的硝酸纤维素膜(3)浸泡于100mL异戊醇水溶液和丙酮的混合溶液中，其中，异戊醇水溶液和丙酮的体积比为5:1，缓慢加热至40℃，保持5～8min，之后将温度提升至65℃，保持3～6min，取出硝酸纤维素膜(3)后用去离子水至少洗涤3遍，然后在60mL质量分数为5％的聚乙烯醇水溶液中浸泡10～20min，室温干燥后保存；步骤五，将样品垫(1)和吸水垫(4)分别贴在底衬两端，金标结合垫(2)贴在底衬上靠近样品垫(1)的一端，样品垫(1)与金标结合垫(2)连接，醋酸纤维素膜(3)贴在底衬上靠近吸水垫(4)的一端，醋酸纤维素膜(3)与吸水垫(4)连接，醋酸纤维素膜(3)与金标结合垫(2)连接，醋酸纤维素膜(3)上包被检测线(5)和质控线(6)。