[发明专利]一种从家蚕血液中提取分离铁蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种从家蚕血液中提取分离铁蛋白的方法，首先选取特定蚕龄的家蚕喂食一定浓度为的Fecl3溶液，连续喂食2‑4天后，剪破家蚕尾角，收集家蚕血液，向其中加入少量的苯基硫脲，再加入蛋白裂解液，充分混匀后，进行液氮冻融，再超声波破碎，然后离心分离，取上清液，水浴加热，再离心分离，取上清液，用超滤管进行浓缩，收集截流液，经验证该截流液为浓缩的家蚕铁蛋白，进一步以PAGE胶回收的方法获得高浓度的铁蛋白。本发明方法成本低，材料来源丰富和提取工艺简单，为铁蛋白的获得提供了一种新途径。

主权项

1.一种从家蚕血液中提取分离铁蛋白的方法，其特征在于，具体操作步骤如下：A、选取特定蚕龄的家蚕喂食浓度为9％‑11％的Fecl3溶液，连续喂食2‑4天后，剪破家蚕尾角，收集家蚕血液，收集管中加入少量的苯基硫脲，摇匀；B、向步骤A收集的血液里加入蛋白裂解液，每100μL的血液加入0.8‑1.2ml裂解液，充分混匀，得到混合样品液；C、将步骤B得到的混合样品液，先液氮冻融，再超声破碎9‑11分钟，然后在3‑4℃的温度下,以11000‑13000rpm的转速，离心分离14‑16mins，取上清液；D、将步骤C得到的上清液置于74‑76℃的水浴中加热1.5‑2.5小时，再在3‑5℃温度下,以11000‑13000rpm转速，离心分离14‑16min，取上清液；E、选择分子量为95‑105kDa的Millipore蛋白超滤浓缩离心管，将步骤D所得的上清液进行浓缩，收集截流液，经验证该截流液为浓缩的家蚕铁蛋白粗提液；F、步骤E获得的铁蛋白粗提液经Native‑PAGE后切下黄色条带胶，以PAGE胶蛋白回收试剂盒回收即得家蚕铁蛋白，采用Bradford方法定量，测得铁蛋白浓度为5μg/μL。