[发明专利]诱导分化睾丸间质细胞的方法及其在性功能恢复中的应用

摘要

本发明公开了一种诱导分化睾丸间质细胞的方法及其在性功能恢复中的应用，属于生物医药技术领域，利用充间质干细胞诱导分化睾丸间质细胞，并利用睾丸间质细胞与一定比例的其他成分组成性功能恢复药物，将该性功能恢复药物制成注射液，以注射的方式注射到病灶区域，通过睾丸间质细胞分泌睾酮素来恢复体内的睾酮水平，有效恢复男性性功能。总之，本发明安全有效，实用性强，高效的诱导分化出睾丸间质细胞，并且本发明药物可以有效地恢复男性性功能等优点。

主权项

1.一种诱导分化睾丸间质细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤:(1)间充质干细胞的培养:将间充质干细胞单体按4‑6×105/ml接种于干细胞培养液中，并置于38℃的培养箱内，以1℃/天的速度降至36℃，后一直恒温保持在36℃，之后每2‑3天换液传代一次，收获4‑6代间充质干细胞，然后用体积比为2:1.5的0.3％胶原酶和0.25％胰蛋白酶先后加入进行消化25‑40min，再通过振荡器震荡10‑12min，得到培养扩增的间充质干细胞；其中干细胞培养液为DMEM和F12按体积比1.5:1混合后并加入3％FBS作为基础培养液，还含有55ng/ml EGF、15ng/ml bFGF、3％非必需氨基酸、0.3mM GABA、1.5％复合维生素，余量为超纯水；(2)诱导分化睾丸间质细胞:将步骤(1)得到的间充质干细胞按照4‑6×104/ml的细胞密度贴壁在二氧化钛纳米管容器上诱导培养，贴壁培养2天后更换诱导培养液进行培养，3‑4天后半量换液，5‑6天时终止诱导；其中诱导培养液为DMEM作为基础培养基，还含有8％FBS、80U/ml青霉素、60μg/ml青链霉素、35μg/ml微量元素化合物、25μg/ml谷氨酰胺、150uM二丁酰环磷腺苷、17μg/ml丙氨酰谷氨酰胺、15ng/ml EGF和4ng/ml LH，余量为超纯水。