[发明专利]红细胞膜表面修饰基因递送系统及制备方法及应用

摘要

本发明公开了红细胞膜表面修饰基因递送系统及制备方法及应用，制备：一.取血液，移除血浆和白细胞层，得样品1；清洗，加入0.25×PBS缓冲溶液，冰浴放置，使红细胞膜破裂并释放血红素，离心，收集样品2；清洗，离心，得样品3，加入到PBS缓冲溶液中，超声，得样品4；通过脂质体挤出器来回挤压过纳米聚碳酸酯薄膜，反复进行，收集红细胞膜囊泡液为样品5；超声，得纳米红细胞膜液为样品6；二.基因复合物的制备；三.将样品6滴加到基因复合物中,得红细胞膜表面修饰基因递送系统。本发明的系统，转染效率高，细胞毒性低。生物相容性好，在血液中稳定，避免了其在体内很快被清除，在体内循环时间大大延长，有利于基因递送与表达。

主权项

1.红细胞膜表面修饰基因递送系统的制备方法，其特征是包括如下步骤：一.纳米红细胞膜液的制备：(1)按比例，取375微升血液，加入EDTA，阻止其凝血，在600‑1000g转速、4℃条件下离心5‑10分钟，移除血浆和白细胞层，得到样品1；所述EDTA和所述血液比例为1.5毫克/毫升；(2)样品1用1×PBS缓冲溶液清洗至少5次，加入相当于所述血液体积8‑20倍的0.25×PBS缓冲溶液，冰浴条件下，放置30‑60分钟，使红细胞膜破裂并释放血红素，在4000‑5000g转速下离心10‑15分钟，收集浅粉色物为样品2；(3)样品2用1×PBS清洗至少5次，离心，得到样品3，加入到8毫升pH＝7.4的PBS缓冲溶液中，超声1‑2小时，得到样品4；(4)将样品4通过脂质体挤出器来回挤压过200‑800纳米的聚碳酸酯薄膜，反复进行至少10次，收集红细胞膜囊泡液为样品5；(5)将样品5超声1‑2小时，得纳米红细胞膜液为样品6，备用；二.基因复合物的制备：(1)以DMSO为溶剂，配制浓度为2‑5毫克/毫升的PLGA‑PEI液为液体3，将液体3以10秒一滴的速度滴入搅拌的pH＝7.4的PBS缓冲溶液中，密封、静置5‑10小时；液体3与pH＝7.4的PBS缓冲溶液的体积比为1：5‑20；PLGA‑PEI为P(LA‑co‑GA)‑g‑PEI的简称；(2)将步骤(1)获得的液体移入截留分子量为1000‑3500的透析袋中，用pH＝7.4的PBS缓冲溶液透析2‑3天，得到基因载体液；(3)pH＝7.4的PBS缓冲溶液配制的浓度为0.10毫克/毫升的基因溶液，在搅拌下，按PEI中的氮/基因中的磷的摩尔比＝20的比例，滴加到0.2毫克/毫升基因载体液中，搅拌1‑2小时,得到基因复合物；三.按体积比1‑3:1的比例，将样品6滴加到基因复合物中,得到红细胞膜表面修饰基因递送系统。