[发明专利]一种人皮肤角质形成层细胞的分离及培养方法在审
| 申请号： | 201810345912.0 | 申请日： | 2018-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN110387348A | 公开（公告）日： | 2019-10-29 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 江苏齐氏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214434 江苏省无锡市江阴市东*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种人皮肤角质形成层细胞的分离及培养方法，包括以下步骤：（1）切取新鲜皮肤组织，4℃运回实验室；（2）PBS清洗3次；（3）剪碎组织，并用中性蛋白酶4℃消化；（4）分离真皮与表皮；（5）表皮组织用预热的胰蛋白酶继续消化；（6）终止消化，离心，弃上清；（7）锥虫蓝染色检测细胞活性；（8）细胞计数后用完全培养基重悬接种到包被后的培养瓶，置于37℃、5%CO2环境中培养；（9）差速贴壁法去除成纤维细胞；（10）细胞鉴定。本发明提供的一种人皮肤角质形成层细胞的分离及培养方法，操作简单，所得细胞数量多，成活率高，是一种理想的人皮肤角质形成层细胞分离与培养方法，为实验提供可靠的细胞资源。 | ||
| 搜索关键词： | 角质 细胞 人皮肤 消化 胰蛋白酶 差速贴壁法 成纤维细胞 完全培养基 中性蛋白酶 表皮组织 皮肤组织 染色检测 细胞分离 细胞活性 细胞鉴定 培养瓶 预热的 表皮 真皮 包被 剪碎 切取 去除 重悬 锥虫 成活率 接种 并用 新鲜 | ||
【主权项】：
1.一种人皮肤角质形成层细胞的分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）无菌条件下切取新鲜皮肤组织，4℃密封运回实验室；（2）无菌操作台内，预冷PBS清洗皮肤组织3次，剔除表面血管、脂肪、结缔组织；（3）剪碎组织，并用中性蛋白酶4℃消化；（4）分离真皮与表皮；（5）表皮组织用预热的胰蛋白酶继续消化；（6）终止消化，离心，弃上清；（7）取细胞滤液用锥虫蓝染色检测细胞活性；（8）细胞计数后用完全培养基重悬接种到包被后的培养瓶，置于37℃、5% CO2环境中培养；（9）差速贴壁法去除成纤维细胞；（10）细胞鉴定。
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