[发明专利]通过内部标准物质谱检测微生物的内标校正方法

摘要

本发明提供一种通过内部标准物来质谱检测微生物的方法，该内部标准物具有已知的分子量和质荷比，其在微生物检测过程中并不干扰微生物特征蛋白的峰值谱图。本发明还提供了所述内部标准物组合、试剂组合物及其相关检测产品。本发明中利用内部标准物质校正单个微生物样品检测的方法，可适用于包括真菌，细菌等各类用于MALDI‑TOF MS检测的微生物样品中，提高微生物鉴定的准确率，同时弥补了目前市场上只有外部标准物做校正的不足。

主权项

1.一种通过试剂组合物用于飞行时间质谱系统鉴定微生物样品的内标校正方法，步骤包括：(1)用灭菌牙签(或者1μl接种环)挑取部分合适的单菌落于装有10μl组分I的离心管中，进行细胞破碎，蛋白及多肽释放，裂解5分钟；(2)取上述溶液1μl加到靶板的孔位上，室温干燥。(3)取蛋白标准品1μl覆盖到同一孔位上，自然干燥；(4)打开组分II的微管，移取1μl组分II加到同一孔位上，自然干燥；(5)靶板放入飞行时间质谱系统中进行检测，其中通过比较内部标准物的待测分子量与实际分子量的差值，为待测微生物特征蛋白的分子量进行校正；其中，该试剂组合物主要成分包括：组分I：乙腈和甲酸；组分II：乙腈，三氟乙酸和α‐氰基‐4‐羟基肉桂酸；组分Ⅲ：1000Da<平均分子量<3000Da和12000Da<平均分子量<20000Da的内部标准物，其中所述内部标准物选自1000Da<平均分子量<2000Da的多肽P(33507‐63‐0)和/或多肽P14R(synthetic peptide)；和/或者，其中所述内部标准物选自2000Da<平均分子量<3000Da的多肽ACTH fragment18‐39(human)；以及，其中所述内部标准物选自12000Da<平均分子量<180000Da的马肌红蛋白Apomyoglobin(equine)。