[发明专利]一种禽腺病毒精纯化的方法

摘要

本发明公开了一种禽腺病毒精纯化的方法，包括步骤如下：1.取在细胞瓶中培养的鸡胚细胞，进行病毒接种，并加入DMEM培养基，将细胞瓶置于37℃转瓶培养箱中继续培养，接毒后，收获瓶内所有的病毒细胞培养液，经离心后收集上清液；2.使用超滤膜包对步骤1所获得的上清液进行10‑40倍浓缩；3.通过G200分子筛层析填料对步骤2所得液体进行分子筛层析；4.使用超滤膜包对步骤3回收的病毒液进行3‑10倍浓缩；5.使用阴离子交换层柱对步骤4所得病毒液进行层析纯化；6.使用超滤膜包对步骤5回收的病毒液进行4‑10倍浓缩，得到纯化后的禽腺病毒。本发明的纯化方法可在保持病毒具有良好活性的前提下对病毒液中的杂蛋白进行高效纯化，方便病毒的后续生物学应用。

主权项

1.一种禽腺病毒精纯化的方法，其特征在于，所述精纯化方法的步骤如下：步骤1：取在细胞瓶中培养的鸡胚细胞，弃去瓶内营养液，使用无菌PBS对瓶内鸡胚细胞洗涤3次，按照每瓶1mL禽腺病毒培养液进行病毒接种，在37℃的条件下吸附1h后，弃去病毒液，加入DMEM培养基，将细胞瓶置于37℃转瓶培养箱中继续培养，接毒3d后，取出细胞瓶，反复冻融3次，收获瓶内所有的病毒细胞培养液，将培养液在4000r/min的条件下离心30min，收集上清液；按照每次所需用量进行分装，并冻存于‑80℃的冰箱中；步骤2：使用超滤膜包对步骤1所获得的上清液进行10‑40倍浓缩；步骤3：对步骤2所得液体的蛋白含量和病毒含量进行测定；步骤4：通过G200分子筛层析填料对步骤3所得液体进行分子筛层析，并使用1‑3柱体积0.1M的PBS平衡层析柱，然后将步骤3所得病毒液上样，并使用0.1M的PBS洗脱，依据280nm紫外光吸收值与时间关系图，收集病毒吸收峰的样品液，并按照步骤3的方法测定溶液中的蛋白含量与病毒含量；步骤5：使用超滤膜包对步骤4回收的病毒液进行3‑10倍浓缩，并按照步骤3的方法测定蛋白含量与病毒含量；步骤6：使用阴离子交换层柱对步骤5所得病毒液进行层析纯化，按照步骤3的方法测定蛋白含量与病毒含量；步骤7：使用超滤膜包对步骤6回收的病毒液进行4‑10倍浓缩，得到纯化后的禽腺病毒，按照步骤3的方法测定蛋白含量与病毒含量。