[发明专利]一种利用微生物合成对羟基苯甲酸的方法

摘要

本发明公开了一种利用微生物合成对羟基苯甲酸的方法，以一株土壤来源的真菌菌株Gongronella sp.w5为生产菌，从其发酵液中提取分离获得对羟基苯甲酸。与化学合成法相比，整个反应过程是在常温常压下进行的，污染小、能耗小，并且制备方法简单，不需要酚类物质作为原料；本发明目标产物纯度大于98％。

主权项

1.一种利用微生物合成对羟基苯甲酸的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1：Gongronella sp.w5发酵液的制备1a、菌种活化：在无菌条件下，从菌株Gongronella sp.w5保藏斜面上划出一菌块接种于固体CPDA培养基上，于28℃生化培养箱中培养5天；1b、种子液制备：在无菌条件下，从1a培养好的固体培养基上铲划出四块菌块转接到装有100mL Ⅵ液体培养基的250mL三角瓶中，28℃、120rpm摇床中进行培养4天，获得的发酵产物作为种子液；1c、发酵：将1b获得的种子液匀浆打碎，匀浆液按2.5％的体积比接种到装有400mL Ⅵ液体培养基的1L三角瓶中，37℃、120rpm摇床中培养3天，收集发酵液50L；步骤2：Gongronella sp.w5发酵液粗提物的制备将步骤1收集的50L发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取，合并萃取液，旋蒸浓缩除去溶剂，获得粗提物浸膏；步骤3：粗提物的分离将步骤2获得的粗提物浸膏用甲醇溶解，0.22μm滤膜过滤，上硅胶柱进行粗分离，梯度洗脱后得到组分4；步骤4：组分4的分离纯化将步骤3获得的组分4过ODS反相柱，进行梯度洗脱，获得对羟基苯甲酸。