[发明专利]利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β-防御素的方法在审
| 申请号： | 201810365031.5 | 申请日： | 2018-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN108531493A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 曹贵方;王鑫;智达夫;李喜和;刘默凝;李秀男;魏薇;田志鹏;龙鑫;王大清;张福全 | 申请（专利权）人： | 内蒙古农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 天津市杰盈专利代理有限公司 12207 | 代理人： | 赵敬 |
| 地址： | 010018 内蒙古自*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | 一种利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β‑防御素的方法，利用SUMO融合技术通过RT‑PCR扩增蒙古绵羊β防御素sbd ‑1基因，与SUMO相连后,连入Pet‑22b中，获得pet‑22b‑SUMO‑sbd‑1重组质粒，转入到大肠杆菌BL21(DE3)细胞表达，成功构建pet‑22b‑SUMO‑sbd‑1重组载体，将表达产物通过超声破碎,脱盐,亲和层析,浓缩,SUMO酶切,冷冻干燥后,将其分别作用于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，通过抑菌实验证明，sbd‑1对大肠杆菌BL21能形成抑菌环，并且抑菌作用与浓度相关，最终得到了绵羊β‑防御素sbd‑1，为下一步代替抗生素提供理论基础,以及对大量生产β‑防御素(sbd‑1)提供方法依据｡ | ||
| 搜索关键词： | 防御素 绵羊 大肠杆菌 体外表达 修饰物 泛素 抑菌 金黄色葡萄球菌 表达产物 超声破碎 理论基础 亲和层析 细胞表达 抑菌作用 重组载体 重组质粒 构建 酶切 脱盐 抗生素 浓缩 转入 基因 融合 成功 | ||
【主权项】：
1.一种利用小泛素相关修饰物SUMO体外表达绵羊β‑防御素的方法，其特征在于：它包括以下步骤：1）、以RT‑PCR的方法获得克隆了SUMO‑sbd‑1的成熟肽全基因序列；2）、克隆入原核表达载体pet‑22b中，构建表达载体pet‑22b‑ SUMO‑sbd‑1；3）、转化DH5α感受态细胞，提出SUMO‑sbd‑1蛋白；4）、转化到BL21(DE3)感受态细胞构建表达菌株；5）、诱导表达、超声破碎、蛋白纯化、浓缩、抑菌实验，得到绵羊β‑防御素sbd‑1目的蛋白。
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