[发明专利]一种以大白菜腋芽为外植体的快速繁育方法

摘要

本发明提供了一种以大白菜腋芽为外植体的快速繁育方法，具体包括以下步骤：切下腋芽作为外植体；对腋芽进行灭菌，清洗；将腋芽置于芽增殖培养基上进行培养；将外植体上增殖的芽切下，蘸取IBA溶液，在非琼脂固体培养基中进行不定根诱导；将再生苗转入花盆基质中置于室温下，给予自然光照培养。本发明以大白菜腋芽为外植体，对增殖培养基中植物生长调节物质的使用浓度进行了优化。利用已有的芽原基进行个体增殖，提高了大白菜组织培养的再生效率，成芽速度快，且受基因型影响较小。培养过程简单，可以在短时间内对优异的育种材料和种质资源及时扩繁与利用，大大加速育种进程，为解决AA基因组作物的再生难题提供了新的途径。

主权项

1.一种以大白菜腋芽为外植体的快速繁育方法，其特征在于包括以下步骤：1）选取结球期大白菜，剥去叶球外叶，将叶柄基部与短缩茎连接处的腋芽切下；2）在无菌条件下，先用酒精进行表面消毒，无菌水漂洗；再倒入NaClO溶液灭菌，无菌水漂洗；漂洗结束后，吸干腋芽的多余水分；灭菌后，将腋芽基部多余的短缩茎组织切除；3）将腋芽的芽尖向上置于芽增殖培养基上进行培养；4）腋芽在培养基中培养28d后，转入新的芽增殖培养基中继代培养；将外植体上增殖的长度大于1.5cm的具有独立生长点的再生芽切下；5）将切下的再生芽基部在过滤灭菌的IBA溶液中浸蘸后，插入装有固体生根基质的培养瓶中，封好瓶盖，进行生根培养；6）当再生芽高度大于3cm时，打开培养瓶盖炼苗，将再生苗连同瓶中的基质一同转入花盆基质中，将再生植株置于室温下，给予自然光照培养；所述腋芽的切割处位于腋芽基部以下3 mm‑4mm，包含部分短缩茎组织；所述步骤3）中的芽增殖培养基为MS培养基+0.5mg/L TDZ+0.1mg/L NAA+2mg/L AgNO₃+30g/L蔗糖+0.8mg/L琼脂，pH为5.8；所述步骤5）中固体生根基质的制备为：将蛭石、草炭及蒸馏水按1:1:0.5的体积比搅拌均匀后分装入培养瓶灭菌。