[发明专利]一种翘嘴鲌亲子鉴定微卫星荧光多重PCR的方法

摘要

本发明涉及一种翘嘴鲌亲子鉴定微卫星荧光多重PCR的方法，首先筛选出16对SSR引物，通过优化组合选出12对组成3个多重PCR组；然后在一个PCR反应体系中加入同属一组但浓度不同的4对SSR特异性引物对，采用不同的反应体系同时对同一个DNA模板的不同区域扩增出多个目的片段；通过电泳抽样检测后送生物公司在测序仪上进行分型，并获取样本相应位点的基因型；最终用于分析亲本和子代的亲子关系。本发明涉及的微卫星标记的扩增体系，节约DNA样本，实验效率高，可在翘嘴鲌的亲子鉴定、种群遗传多样性和遗传结构的评估方面进行推广。

主权项

1.一种翘嘴鲌亲子鉴定微卫星荧光多重PCR的方法，包括以下步骤：（1)翘嘴鲌样本DNA提取取翘嘴鲌个体的鳍条，采取酚—氯仿法提取基因组DNA，将获得的DNA测定浓度后稀释至约50ng/μl；（2)翘嘴鲌多态性微卫星序列的筛选用步骤(1)获得的基因组DNA为模板，根据Primer Premier 6.0软件设计微卫星位点引物，合成引物，并通过对翘嘴鲌个体进行PCR扩增，筛选出16对引物，所述引物包括正向引物、反向引物；（3)对微卫星位点多重PCR扩增效果摸索、确定进行多重PCR扩增：对步骤（2) 中筛选得到的16对引物按照扩增后的PCR产物按照120‑180bp、200‑260bp、280‑340bp、360‑420bp四个不同区间进行初步分组；首先两两组合，选出扩增清晰的组合，再依次进行3个和4个位点的多重PCR体系的构建；最终获得由12个微卫星位点组成的3组4重 PCR体系，将每个位点上游引物的5'端进行荧光修饰，然后，对所有亲本和子代DNA样本进行多重PCR扩增；4)获取翘嘴鲌样本的基因型数据。