[发明专利]一种高效率大豆CRISPR/Cas9系统的构建方法及应用在审
| 申请号： | 201810384372.7 | 申请日： | 2018-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN108588128A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 王东;唐雅君;贺热情;朱友林 | 申请（专利权）人： | 南昌大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;A01H5/00;A01H6/54 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 王玉国 |
| 地址： | 330000 江西省*** | 国省代码： | 江西;36 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种高效率大豆CRISPR/Cas9系统的构建方法及应用，将Staphylococcus aureus Cas9蛋白进行拆分表达，为了提高对大豆基因组的编辑效率及广谱性，构建了大豆SaCas9编辑系统。本发明将一个低效率的编辑系统转变为高效率编辑系统，不仅拓展了编辑大豆基因组的应用广度，也为今后解决农作物基因组编辑效率的问题上提供新思路。 | ||
| 搜索关键词： | 编辑系统 高效率 构建 大豆基因组 大豆 应用 广谱性 基因组 蛋白 农作物 拓展 | ||
【主权项】：
1.一种高效率大豆CRISPR/Cas9系统的构建方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1)人工合成大豆特异的U6启动子序列、Staphylococcus aureus Cas9序列和Streptococcus pyogenes Cas9序列；步骤2)将扩增目的片段GmU6，sgRNA，35S，N‑SpCas9，C‑SpCas9，Bar片段构建于实验室改造的pCAMBIA1300骨架载体上，获得以下载体骨架：GmU6::sgRNA‑35S::SpCas9‑35S::BarGmU6::sgRNA‑35S::SaCas9‑35S::BarGmU6::sgRNA‑35S::N‑SpCas9‑35S::C‑SpCas9‑35S::BarGmU6::sgRNA‑35S::N‑SaCas9‑35S::C‑SaCas9‑35S::Bar；步骤3)从SoyBase中选择3个大豆基因以及2个大豆gma‑miRNA，根据选定的基因以及miRNA设计靶位点序列，合成两段带有BsaI酶切后形成的粘性末端互补序列的引物，长度为19bp‑21bp；步骤4)将sgRNA靶位点引物退火后形成的带有粘性末端的核心序列，组装于步骤2)所构建的载体；步骤5)获得完整的大豆CRISPR/Cas9编辑载体。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南昌大学，未经南昌大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201810384372.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。
