[发明专利]一种基于PRET的磷光探针定量检测凝血酶的方法

摘要

本发明公开了一种基于PRET的磷光探针特异性引物定量检测凝血酶的方法。为了提高其灵敏度，本发明在TBA上进行修饰，得到TBA‑BHQ2探针。利用水热合成法合成的磷光QDs作为能量供体，TBA‑BHQ2作为能量受体，构成磷光共振转移检测机制，导致磷光猝灭。由于凝血酶适配体与凝血酶之间有较强的结合，从而使MPA包覆的Mn掺杂ZnS磷光量子点与TBA‑BHQ2混合猝灭体系中的TBA‑BHQ2离开量子点表面与凝血酶形成新的复合物，从而使体系磷光强度恢复。相对于荧光量子点，磷光量子点因其磷光寿命长、可避免自体荧光和散色光的干扰、选择性强、检测时无需加入任何除氧剂和诱导剂等优点，在检测中运用更加广泛和灵敏。

主权项

1.一种基于PRET的磷光探针特异性引物定量检测凝血酶的方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）将制备的磷光QDs材料均匀分散在水溶液中配制成浓度为500 mg/L的溶液作为检测体系，并使用315 nm作为激发波长，测试体系在590 nm处的磷光发射峰；所述的磷光QDs材料指的是MPA包覆的Mn掺杂ZnS量子点；（2）将TBA‑BHQ2溶液加入到检测体系中并混合均匀，静置以确保两者的相互作用，从而形成QDs/TBA‑BHQ2复合物，考察590 nm处的磷光发射强度的变化情况，从而得到后面检测体系中TBA‑BHQ2的最适浓度0.1 μmol/L；（3）将待测凝血酶溶液TB加入到步骤（2）中并混合均匀，静置以确保分析物与QDs/TBA‑BHQ2复合物相互作用，以形成新的TB/TBA‑BHQ2复合物，考察590 nm处的磷光发射强度的变化情况；（4）以步骤（2）对磷光量子点探针的磷光进行猝灭，以步骤（3）对量子点的磷光进行恢复，并以其对步骤（1）的磷光恢复响应值为检测信号，检测样品中凝血酶的浓度；（5）分别将不同生物分子加入加到步骤（2）中，混合均匀，静置待反应体系稳定后，进行磷光测试，考察其选择性识别能力；所述的不同生物分子指的是L‑半胱氨酸、甘氨酸、L‑组氨酸、L‑亮氨酸、L‑蛋氨酸、L‑苏氨酸或溶菌酶。