[发明专利]通过Tild-CRISPR实现高效精确的靶向整合有效
| 申请号： | 201810399266.6 | 申请日： | 2018-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN110184301B | 公开（公告）日： | 2023-02-24 |
| 发明（设计）人： | 杨辉 | 申请（专利权）人： | 辉大（上海）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90 |
| 代理公司： | 中国专利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 黄登高;初明明 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新区中国（上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供了通过Tild‑CRISPR实现高效精确的靶向整合策略，具体地，本发明提供了一种用于对基因组的靶位点进行基因靶向整合的反应体系，所述反应体系包括：供体DNA，所述供体DNA为双链；Cas9蛋白或其编码核酸或表达所述Cas9蛋白的第一表达载体；和sgRNA或表达所述sgRNA的第二表达载体。本发明提供的靶向整合策略的基因编辑效率显著高于其他现有的基因编辑技术，且它对插入片段没有长度的限制。 | ||
| 搜索关键词： | 通过 tild crispr 实现 高效 精确 靶向 整合 | ||
【主权项】：
1.一种用于对基因组的靶位点进行基因靶向整合的反应体系，其特征在于，所述反应体系包括：a)供体DNA，所述供体DNA为双链；b)Cas9蛋白或其编码核酸或表达所述Cas9蛋白的第一表达载体；和c)sgRNA或表达所述sgRNA的第二表达载体；其中，所述的供体DNA具有从5’到3’的式I结构：E1‑R1‑L1‑Z‑L2‑R2‑E2 (I)式中，E1代表无或5’端酶切以后的残留序列；R1代表5’端的同源臂；L1为无或选自下组的元件：连接序列、Loxp元件、或其组合；Z代表待整合的靶基因；R2代表3’端的同源臂；L2为无或选自下组的元件：连接序列、Loxp元件、或其组合；E2代表无或3’端酶切以后的残留序列；其中，所述的R1与所述基因组的靶位点的切割位点的上游侧(或左侧)序列是同源的，而所述的R2与所述基因组的靶位点的切割位点的下游侧(或右侧)序列是同源的。
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