[发明专利]一种高通量筛选分离苏云金芽胞杆菌的方法和应用

摘要

本发明属于微生物学领域，公开了一种高通量筛选分离苏云金芽胞杆菌（简称Bt）的方法和应用。本发明提供的方法，通过连续三步不同策略的选择性培养，使样品中Bt细胞的绝对生物量和相对比例均大幅度提高，需要挑取转接培养和镜检的菌落数减少，分离效率大大提高，操作更加简便；同时需要的样品量减少，可实现高通量操作，特别适用于从样品量很小的样品或Bt生物量很小的样品中分离Bt菌株。

主权项

1.一种高通量筛选分离苏云金芽胞杆菌的方法，包括如下步骤：步骤一，选择性芽胞化培养：将样品悬液涂布在选择性芽胞化培养基的平板上，28‑30℃培养3‑5天，使其中的Bt细胞选择性扩繁并最终芽胞化；步骤二，选择性萌发抑制培养和高温处理：将所述平板上的培养物收集并制备成芽胞悬液，接种到选择性萌发抑制培养基中，28‑30℃摇床培养4‑8小时，使大部分杂菌萌发生长，然后通过65‑80℃处理30‑60分钟；步骤三，选择性富集培养：将上述高温处理后的培养物涂布在选择性富集培养基的平板上，28‑30℃培养12‑18h，使其长出肉眼可见的单菌落，随机挑取至少12个单菌落，转接到新的选择性富集培养基的平板上，28‑30℃培养3‑5天至芽胞期；步骤四，镜检筛选和分离：将所述芽胞化的菌落进行制片镜检，筛选出含有伴胞晶体的菌落，即为分离的Bt菌株；所述的选择性芽胞化培养基，包括：碳酸钙0.05‑0.2g/L，氯化锰0.02‑0.08mM，磷酸钠缓冲液0.03‑0.1M（pH6.8），琼脂粉15‑20g/L，pH值6.0‑7.5；所述的选择性萌发抑制培养基，包括：氯化钠7.5‑15 g/L，胰蛋白胨7.5‑15 g/L，酵母浸粉3.5‑7.5 g/L，乙酸钠15‑35g/L，乙酸钾3.0‑7.5g/L，丙三醇2‑8ml/L，pH值6.0‑7.5；所述的选择性富集培养基，包括：胰蛋白胨3.5‑7.5 g/L，酵母浸粉1.0‑2.0 g/L，碳酸钙0.05‑0.2g/L，氯化锰0.02‑0.08 mM，磷酸钠缓冲液0.03‑0.1 M（pH6.8），葡萄糖3.0‑7.5 g/L，琼脂粉15‑20 g/L，pH值6.0‑7.5。