[发明专利]一种猪粪抗生素抗性基因的定量检测方法在审
| 申请号： | 201810407462.3 | 申请日： | 2018-05-02 |
| 公开（公告）号： | CN108642149A | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 刘超翔;范洪勇;黄栩 | 申请（专利权）人： | 中国科学院城市环境研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/6806;C12N15/70 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 361021 福建*** | 国省代码： | 福建;35 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种猪粪中抗生素抗性基因的定量检测方法，步骤为：1)选用经常服用抗生素猪的猪粪DNA为模板，采用PCR扩增目的抗性基因片段；2)切胶回收纯化扩增后的目的抗性基因，将抗性基因连接在T载体上，然后转化感受态大肠杆菌细胞，涂LB平板后挑选阳性克隆子；3)用琼脂糖凝胶电泳检测扩大培养菌液的质量，选克隆成功的菌液提取质粒，检测质粒浓度，换算出质粒所携带抗性基因的拷贝数，并按10倍为稀释梯度稀释备用，作为抗性基因标准品；4)提取猪粪样品的基因组DNA，将猪粪样品DNA和抗性基因标准品同时进行定量PCR扩增，从而最终得出猪粪样品的抗性基因拷贝数。本发明不依赖于微生物培养，操作简单，检测速度高，灵敏度高，数量上也更为直观。 | ||
| 搜索关键词： | 抗性基因 猪粪 质粒 抗生素抗性基因 定量检测 标准品 拷贝数 菌液 扩增 琼脂糖凝胶电泳检测 感受态大肠杆菌 抗性基因片段 微生物培养 阳性克隆子 基因组DNA 扩大培养 梯度稀释 定量PCR 样品DNA 灵敏度 检测 换算 切胶 稀释 抗生素 备用 克隆 直观 细胞 回收 携带 转化 成功 | ||
【主权项】：
1.猪粪中抗生素抗性基因的定量检测方法，其特征在于包括以下步骤：1）提取经常服用抗生素猪的猪粪的DNA，以猪粪DNA为模板，采用PCR扩增目的抗性基因片段；2）切胶回收纯化扩增后的目的抗性基因片段，将抗性基因连接在pGEM – T Easy载体上，然后转入感受态大肠杆菌，转化后大肠杆菌经培养后，涂LB平板，然后挑选阳性克隆子，用LB 培养液扩大培养；3）用琼脂糖凝胶电泳检测扩大培养菌液的质量，挑选克隆成功的菌液提取质粒，检测质粒浓度，换算出质粒所携带抗性基因的拷贝数，并按10 倍为稀释梯度稀释备用，作为抗性基因标准品；4）将猪粪样品DNA 和抗性基因标准品同时进行定量PCR 扩增，根据抗性基因标准品的拷贝数和其扩增的CT 值生成标准曲线，进而得出猪粪样品的抗性基因的拷贝数。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国科学院城市环境研究所，未经中国科学院城市环境研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201810407462.3/，转载请声明来源钻瓜专利网。
