[发明专利]一种提高外周血白细胞分泌细胞因子检测率的方法

摘要

本发明公开了一种提高外周血白细胞分泌细胞因子检测率的方法，包括以下步骤：S1、取全血加培养液稀释；S2、加佛波醇脂和钙离子酶素，培养6h，且在培养的后4h加入莫能酶素，得待检测细胞；S3、取待检测细胞加细胞表面标记抗体染色，用全血标本溶解红细胞，染色缓冲液洗，加多聚甲醛避光固定，加透膜缓冲液透膜，加牛血清白蛋白和小鼠血清封闭,加细胞因子抗体染色，加透膜缓冲液洗，加染色缓冲液洗，得染色后的细胞；S4、在流式细胞仪上进行检测。本发明提出的方法，适用范围广，细胞因子分泌细胞的比率高，且实验数据与对照组数据具有统计学意义。

主权项

1.一种提高外周血白细胞分泌细胞因子检测率的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取500μl全血加500μl不完全rpmi‑1640培养液稀释，得混合物A；S2、培养：向混合物A中加入终浓度为15～25ng/ml的佛波醇脂和终浓度为0.5～1.5μg/ml的钙离子酶素，得混合物B，然后将混合物B在24孔培养板内培养6h，且在培养的后4h加入终浓度为2～3μmol/L的莫能酶素阻断细胞因子分泌，培养后即为待检测细胞；S3、染色：取步骤S2培养后的待检测细胞100μl，加入细胞表面标记抗体，在4℃条件下避光染色30min，再用全血标本溶解红细胞，然后用1ml染色缓冲液洗2次，加入500μl质量浓度为2％的多聚甲醛，在4℃条件下避光固定30min，加500μl透膜缓冲液，在4℃条件下避光透膜15min，加入20μl质量浓度为5％的牛血清白蛋白和5μl小鼠血清，在4℃条件下避光封闭30min,加入细胞因子抗体，在4℃条件下避光染色30min，加入1ml透膜缓冲液洗2次，最后加入1ml染色缓冲液洗1次，得染色后的细胞；S4、将步骤S3得到的染色后的细胞在流式细胞仪FACSCalibur上进行检测。